還陽參化學成分探究范文

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《中國中藥雜志》2015年第二十期

還陽參為菊科植物還陽參Crepiscrocea(Lam.)Babc.的干燥全草，味苦，性微寒，具有益氣、止咳平喘、清熱降火之功效，主要用于治療慢性支氣管炎、肺結核等疾?。?］。課題組前期對還陽參這一地方藥材進行資源調查、化學及藥理活性等多方面的研究，明確了還陽參含有酚酸，甾體，多糖等多種化學成分，分離并鑒定了數種化合物［2］。在前期研究中發現還陽參乙酸乙酯部位具有止咳平喘活性，本實驗主要針對該部位化學成分進行研究。通過采用硅膠、MCI和SephadexLH-20柱色譜及制備液相等方法從乙酸乙酯部位中分離并鑒定了12個化合物，分別為還陽參酯素Ⅰ(1)，8β-(2-羥基-2-甲基-3-氧代丁酮酰氧基)糖美菊素(2)，tectoroside(3)，木犀草素-7-O-葡萄糖苷(4)，大波斯菊苷(5)，七葉內酯(6)，原兒茶醛(7)，反式-4-羥基肉桂酸(8)，咖啡酸(9)，2-羥基-3-(4-羥基苯基)丙酸甲酯(10)，2-羥基-3(4-羥基苯基)丙酸乙酯(11)和順式-3，4-二羥基-β-紫羅蘭酮(12)。其中化合物1為新化合物，除化合物4，9外，其余化合物均為首次從該植物中分離得到。

1材料

BrukerDRX600MHz，BrukerDRX500MHz型核磁共振譜儀;APIQSTAR飛行時間質譜儀和VG-Auto-Spec-3000質譜儀BrukerApexIVFTMS;分析型HPLC為Agilent1100型(ZORBAXExtend-C18柱，4.6mm×150mm，5μm);制備型HPLC為Agilent1100(ZORBAXSB-C18柱，21.2mm×150mm和9.4mm×150mm，5μm);MPLC為瑞士步琪實驗室技術服務有限公司BüchiSepacoreSystem;UV2450紫外-可見分光光度計(日本島津公司);傅里葉變換紅外光譜儀(美國ThermoFisher公司)。乙腈(色譜純)，TFA(分析純)均為國藥集團化學試劑有限公司產品。正相柱色譜硅膠(200～300目)由青島海洋化工廠生產;反相柱色譜硅膠(ChromatorexC-18，40～75μm)由日本富士Silysia化工有限公司生產;SephadexLH-20由瑞典AmershamBiosciences公司生產;D101大孔樹脂(批號120106)為天津市海光化工有限公司提供。還陽參C．crocea(Lam.)Babc.于2013年6月采自山西省雁北地區山陰縣一帶，放置陰涼處自然晾干，憑證標本(2013001)，由山西省食品藥品檢驗所高天愛主任藥師鑒定，存放于山西省中醫藥研究院。

2提取與分離

還陽參藥材約4kg，粉碎，用70%乙醇回流提取3次，每次1h，濾液合并濃縮，浸膏，加水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇多次萃取，萃取液減壓濃縮，得石油醚層、乙酸乙酯層、正丁醇層及水層4個部位。取乙酸乙酯萃取物200g，加水超聲溶解后，濾過，濾液通過D101大孔吸附樹脂進行柱色譜，依次用水，10%乙醇，50%乙醇，95%乙醇溶液洗脫，收集各部分洗脫液，依次命名為EA1～4，分別減壓回收溶劑，冷凍干燥，取EA3部位(39g)經硅膠柱分離(氯仿-甲醇100∶1～5∶1洗脫)，分為6個部分Fr.1～6。Fr.2經硅膠柱(氯仿-甲醇50∶1洗脫)分為3個部分Fr.2.1～2.3，Fr.2.1進一步經Sepha-dexLH-20柱(氯仿-甲醇1∶1洗脫)分離得到化合物11(1.065g)。Fr.2.2經SephadexLH-20柱(氯仿-甲醇1∶1洗脫)分離得到化合物12(675mg)。Fr.2.3經硅膠柱分離(氯仿-甲醇100∶1～25∶1)及重結晶分別得到化合物1(39mg)和6(376mg);母液進一步經中壓制備液相(MPLC，10%～30%甲醇洗脫)分離得到2個部分Fr.A，B。Fr.A經硅膠柱分離(氯仿-甲醇70∶1)及重結晶得到化合物7(115mg);Fr.B經SephadexLH-20柱分離(氯仿-甲醇1∶1洗脫)及重結晶得到化合物8(21mg)。Fr.3重結晶得到化合物9(1.176g)。Fr.4經MPLC(10%甲醇～甲醇洗脫)分離得到6個部分Fr.4.1～4.6，Fr.4.1經SephadexLH-20柱(甲醇洗脫)分離得到化合物10(52mg);Fr.4.2經SephadexLH-20柱(甲醇洗脫)、硅膠柱色譜(氯仿-甲醇20∶1～5∶1)分離得到2個部分Fr.C，D。Fr.C經SephadexLH-20柱(氯仿-甲醇1∶1洗脫)分離得到化合物2(100mg)。Fr.5進一步經硅膠柱色譜(氯仿-甲醇20∶1～5∶1洗脫)、SephadexLH-20柱(氯仿-甲醇1∶1洗脫)分離得到化合物3(54mg)。Fr.6經MPLC(10%～30%甲醇洗脫)分離得到化合物4(34mg)和5(2mg)。以上化合物經HPLC檢測純度均＞95%。

3結構鑒定

化合物1無色結晶(CHCl3)，HR-ESI-MSm/z449.1564［M+Na］+(計算值為449.1576)，分子式為C24H26O7，不飽和度為12。UV(MeOH)λmax:221，278nm。IR(KBr)νmax:3467，3277，2951，1736，1723，1664，1254，1167，965，840cm－1。13C-NMR(DMSO-d6，150MHz)及1H-NMR(DMSO-d6，600MHz)譜顯示化合物有1個甲基，4個亞甲基，6個次甲基，4個季碳，1個內酯環，2個雙鍵。其中δC193.4(C-3)，δC169.0(C-12)為2個羰基信號，δC144.2(C-10)和δC135.3(C-11)為2個雙鍵季碳信號，δC121.8(C-13)，δC115.1(C-14)為2個雙鍵亞甲基碳信號。以上2個雙鍵季碳信號，2個雙鍵亞甲基碳信號和2個羰基信號為典型的愈創木烷型倍半萜的10(14)，11(13)，3和12位的環外雙鍵特征［3］。1H-NMR譜中的δ4.41表明存在愈創木烷內酯環［4］，結合其他碳氫信號，進一步證實化合物1為愈創木烷內酯類化合物［4］?；衔锊ㄗV數據與文獻［5］中報道的化合物8-epigrosheimin數據及其相似，所不同的是化合物在C-8位連接的是酯基而不是羥基。HMBC譜中，H-8(δH5.53)與C-1'(δC172.9)有遠程相關，證實C-8位連有酯鍵;羥基-OH質子信號(δH5.46)與C-1'(δC172.9)，C-2'(δC71.5)和C-3'(δC39.2)有遠程相關，證實羥基連在C-2'位。1H-NMR譜中，δH9.17(1H，s)提示為酚羥基-OH質子信號，δH6.96(2H，d，J=8.4Hz)，δH6.61(2H，d，J=8.4Hz)提示為4個苯環氫質子信號，HMBC譜中，H-3'(δH2.63，2.77，dd)與C-1'(δC172.9)，C-2'(δC71.5)，C-1″(δC127.6)，C-2″/C-6″(δC130.2)有遠程相關，證實對羥苯基連在C-3'位。與相同位置構型一樣的同類型化合物8β-(2-羥基)-2-甲基-3-氧代丁酮酰氧基-糖美菊素進行數據比對，確定化合物1位，5位，7位，8位質子和15位甲基均在一側，為α構型［5］。結合NOE差譜:照射H-6，發現H-4有增益，表明H-6與H-4在同一側均為β構型。至此，確定化合物1的相對構型，各基團的連接順序見圖1。根據SciFinder檢索，該化合物未見報道，為新化合物，命名為還陽參酯素Ⅰ。其核磁數據歸屬見表1。

作者：李媛媛 彭照琪 賀石麟 倪艷 郝旭亮 單位：山西省中醫藥研究院