膽堿酯酶測(cè)量線性范圍評(píng)價(jià)范文

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《臨床檢驗(yàn)雜志》2014年第六期

1評(píng)價(jià)方法

1．1不精密度評(píng)價(jià)在室內(nèi)質(zhì)控滿足CV＜2．7%［1］的條件下，參考CLSIEP15-A2文件［2］，用3個(gè)活性水平標(biāo)本，每天測(cè)1批，每批測(cè)3次，連續(xù)測(cè)量5d。計(jì)算A～F檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)量重復(fù)性不精密度、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)復(fù)現(xiàn)性不精密度。

1．2線性范圍評(píng)價(jià)用A～F檢測(cè)系統(tǒng)，按CLSIEP6-A文件，分別測(cè)量血清標(biāo)本組2的15個(gè)標(biāo)本，每個(gè)標(biāo)本測(cè)量2次，實(shí)驗(yàn)于1d內(nèi)完成。進(jìn)行線性范圍評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)為以1～15號(hào)標(biāo)本的理論活性水平為X軸，測(cè)量結(jié)果為Y軸作圖，檢查并剔除離群值。各廠家測(cè)量系統(tǒng)不精密度符合要求后，用MVS軟件進(jìn)行相關(guān)回歸分析。首先以15個(gè)標(biāo)本的理論值對(duì)實(shí)測(cè)均值進(jìn)行多項(xiàng)式回歸分析，判斷測(cè)量數(shù)據(jù)的最佳擬合方程。若最佳擬合方程為二次或三次多項(xiàng)式即非直線，則計(jì)算各活性水平處非線性范圍偏差(DLi)，DLi為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本各活性水平點(diǎn)處回歸多項(xiàng)式預(yù)測(cè)值與直線回歸方程預(yù)測(cè)值的差值。若滿足|DLi|≤5%，則認(rèn)為在臨床可接受范圍內(nèi)呈線性范圍。若|DLi|≥5%，則去除非線性范圍偏差較大的活性水平點(diǎn)后再次對(duì)各廠家測(cè)量系統(tǒng)線性范圍進(jìn)行評(píng)價(jià)。本實(shí)驗(yàn)采用兩種途徑去除非線性范圍偏差較大的活性水平點(diǎn):一種是依次從高活性水平去除DLi較大的數(shù)據(jù)點(diǎn)，直至|DLi|≤5%，系統(tǒng)編號(hào)A1～F1。另一種為從測(cè)量結(jié)果的兩端去除具有最大DLi的數(shù)據(jù)，直至|DLi|≤5%，系統(tǒng)編號(hào)A2～F2。

2結(jié)果

2．1不精密度評(píng)價(jià)A～F檢測(cè)系統(tǒng)不精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。在重復(fù)性條件下測(cè)量低、中、高3個(gè)活性水平標(biāo)本的CV分別是1．34%、0．88%、0．50%、0．89%、1．21%、1．14%;0．98%、0．44%、0．63%、0．77%、1．03%、0．87%;0．78%、0．43%、0．68%、0．73%、0．84%、0．96%。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)復(fù)現(xiàn)性條件下測(cè)量相同標(biāo)本的CV分別是1．61%、1．25%、0．86%、1．06%、1．32%、1．29%;1．09%、0．94%、0．90%、0．97%、1．15%、0．93%;1．23%、1．22%、0．84%、0．91%、1．00%、1．20%。

2．2線性范圍A～F檢測(cè)系統(tǒng)線性范圍及評(píng)價(jià)結(jié)果見表3，A～F系統(tǒng)在845～14004U/L的活性水平范圍內(nèi)均呈非線性。A1、D1、E1、F1系統(tǒng)擬合方程為一次多項(xiàng)式，在845～7425U/L、845～9304U/L、845～8365U/L、845～6485U/L范圍內(nèi)直接呈線性，B1與C1系統(tǒng)在僅存5個(gè)活性水平點(diǎn)時(shí)仍呈非線性。A2～F2系統(tǒng)中除E2系統(tǒng)最佳擬合為三次多項(xiàng)式外，其余系統(tǒng)均為二次多項(xiàng)式;A2～F2系統(tǒng)的線性范圍分別為1785～13064U/L、1785～9304U/L、1785～9304U/L、1785～14004U/L、1785～10244U/L、2725～10244U/L。

3討論

ChE的測(cè)量方法主要為化學(xué)法及酶耦聯(lián)法［4-5］。化學(xué)法是指在反應(yīng)體系中加入一些與酶促反應(yīng)無(wú)關(guān)、不影響酶催化活性的試劑如5，5''''-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)等來(lái)監(jiān)測(cè)酶促反應(yīng)信號(hào)變化，從而計(jì)算酶催化活性;酶耦聯(lián)法是利用酶催化反應(yīng)的專一性、高效性，以測(cè)定耦聯(lián)酶的催化反應(yīng)速率代表待測(cè)酶活性。筆者調(diào)查目前市售ChE測(cè)定試劑盒，發(fā)現(xiàn)ChE測(cè)量方法中丁酰硫代膽堿/六氰高鐵酸鉀(Ⅲ)法和丁酰硫代膽堿/5，5''''-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)法約占調(diào)查方法總數(shù)的88%，是目前臨床實(shí)驗(yàn)室測(cè)量ChE的主要方法。日本臨床化學(xué)協(xié)會(huì)推薦的p-羥基苯甲酰膽堿/耦聯(lián)酶法雖特異性好，但因試劑價(jià)格昂貴且購(gòu)買困難，國(guó)內(nèi)臨床實(shí)驗(yàn)室很少應(yīng)用。因此本研究對(duì)應(yīng)用以上使用最為廣泛的兩種方法為測(cè)量原理的ChE測(cè)定試劑盒進(jìn)行評(píng)價(jià)，觀察各檢測(cè)系統(tǒng)的不精密度、線性范圍與廠家聲稱范圍的一致性。在不精密度評(píng)價(jià)方面，本研究對(duì)各檢測(cè)系統(tǒng)的重復(fù)性與實(shí)驗(yàn)室內(nèi)復(fù)現(xiàn)性不精密度進(jìn)行了評(píng)價(jià)。重復(fù)性不精密度是指在重復(fù)性測(cè)量條件下的測(cè)量不精密度;實(shí)驗(yàn)室內(nèi)復(fù)現(xiàn)性不精密度是指由實(shí)驗(yàn)室求得，在一組中間不精密度測(cè)量條件下的測(cè)量不精密度。在本研究中若以廠家聲稱不精密度范圍為合格標(biāo)準(zhǔn)，除A系統(tǒng)外，其他廠家測(cè)量系統(tǒng)均符合要求。但由于各檢測(cè)系統(tǒng)聲稱的不精密度合格范圍缺乏一致性，CV從0．4%到10%不等(見表2)，因此盡管A系統(tǒng)不精密度不符合廠家聲稱范圍，也不能證明A廠家測(cè)量系統(tǒng)質(zhì)量劣于其他廠家。若以同一合格標(biāo)準(zhǔn)(CV＜2．7%)［1］再次評(píng)估，則發(fā)現(xiàn)A～F檢測(cè)系統(tǒng)不精密度均合格。因此，廠家在聲稱試劑產(chǎn)品的“不精密度”時(shí)應(yīng)注意此問題。值得一提的是，在根據(jù)EP15-A2文件進(jìn)行不精密度評(píng)價(jià)時(shí)會(huì)出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)復(fù)現(xiàn)性不精密度小于重復(fù)性不精密度的情況，可能與標(biāo)本的重復(fù)測(cè)量次數(shù)少有關(guān)。在線性范圍評(píng)價(jià)方面，ChE參考區(qū)間為男4620～11500U/L，女:3930～10800U/L。根據(jù)ChE參考區(qū)間，本實(shí)驗(yàn)室制備的線性范圍評(píng)價(jià)標(biāo)本的活性水平為845～14004U/L。在該活性水平范圍內(nèi)，A～F檢測(cè)系統(tǒng)均呈非線性。由于ChE活性水平的降低具有重要的臨床診斷意義，因此本實(shí)驗(yàn)首先從ChE高活性水平點(diǎn)去除非線性范圍偏差較大的數(shù)據(jù)，評(píng)價(jià)廠家測(cè)量系統(tǒng)的線性范圍，研究結(jié)果顯示A～F檢測(cè)系統(tǒng)的實(shí)際線性范圍與廠家聲稱明顯不符(見表3)。若從測(cè)量數(shù)據(jù)兩端分別去除非線性范圍偏差較大的數(shù)據(jù)點(diǎn)，則各檢測(cè)系統(tǒng)線性范圍顯著增寬，提示A～F檢測(cè)系統(tǒng)在分析低活性水平ChE血清標(biāo)本時(shí)非線性范圍偏差較大，分析缺乏可靠性。因此本研究選擇從兩端去除非線性偏差較大的活性水平點(diǎn)來(lái)評(píng)價(jià)線性范圍。實(shí)驗(yàn)室在進(jìn)行臨床標(biāo)本測(cè)量前應(yīng)對(duì)廠家測(cè)量系統(tǒng)線性范圍進(jìn)行驗(yàn)證。通常情況下方法學(xué)性能評(píng)價(jià)包括精密度、線性范圍、正確度、抗干擾能力4個(gè)部分，但由于目前尚無(wú)公認(rèn)的ChE催化活性水平測(cè)量參考方法，因此暫時(shí)未對(duì)各檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行正確度評(píng)價(jià)。另由于國(guó)內(nèi)外ChE測(cè)量方法涉及多種測(cè)量原理，且ChE本身具有遺傳多態(tài)性，不同表型和不同原理的測(cè)量方法其干擾因素不盡相同，抗干擾能力的評(píng)價(jià)較為復(fù)雜，將另文報(bào)道。

作者：金仁玲孫慧穎胡濱劉春龍陳寶榮單位：遵義醫(yī)學(xué)院北京航天總醫(yī)院檢驗(yàn)科