抗凝血多肽Hirulog-S的穩定性研究范文

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《軍事醫學雜志》2015年第十二期

［摘要］

目的考察抗凝血多肽hirulog-s原料藥及凍干劑的穩定性，為該藥臨床應用及保存條件的制定奠定基礎。方法采用高效液相色譜法，通過影響因素實驗、加速實驗和長期穩定性實驗測定Hirulog-S原料藥及凍干劑的含量及有關物質的變化。結果影響因素實驗結果表明，溫度、濕度對Hirulog-S原料藥、凍干劑的含量及有關物質變化影響不大;加速實驗(40℃，RH75%)、24個月室溫及4℃長期穩定性實驗顯示，Hirulog-S原料藥及凍干劑含量及有關物質均無顯著變化。結論Hirulog-S原料藥及凍干劑具有較高穩定性，原料藥室溫避光密封保存、凍干粉4℃避光密封保存，暫定有效期2年。

［關鍵詞］

抗凝劑;硬脂酸鏈修飾多肽;Hirulog-S;穩定性;色譜法，高壓液相

Hirulog-S［序列:D-FPRP-GK(stearicacid)GG-QGDFEPIPEDAYDE-NH2］是本實驗室設計的新型抗凝血多肽，含有修飾的硬脂酸側鏈［1］。與臨床藥物比伐盧定(bivatrudin，Hirulog-1，D-FPRPGGGGNGDFEE-IPEEYL)相比具有顯著優點［2～6］:①Hirulog-S的體內抗凝活性為現有抗凝藥物比伐盧定的10倍以上，半衰期適中(3．5h，Hirulog-1為16min)，且作用平緩，不造成APTT高峰，出血性小;②不良反應低，小鼠急性毒性實驗表明，Hirulog-S高于有效劑量100～200倍未發現明顯毒性癥狀，腦、臟器等未出現異常或出血現象;③1～2次/d靜脈注射就可保持很高的抗凝活性，用量僅為比伐盧定的1/10，能克服比伐盧定用量大(250mg/瓶)、藥物峰值濃度高、半衰期短、連續靜脈注射的缺點。本研究基于前期建立的Hirulog-S質量分析方法［7］以及《中國藥典》2010年版［8，9］，研究其原料藥、凍干劑的穩定性，為其臨床應用制定保存條件。

1儀器與試劑

Agilent1200高效液相色譜系統，ChemStationB．04．02處理軟件(安捷倫科技有限公司)。pH計(PE-10)、CP324S電子天平(德國Sartorius)，VotexGenie1振蕩器(美國ScientificIndustries)，Alpha-2LD凍干機(CHRIST)，SHH-GSD系列綜合藥品穩定性試驗箱(重慶市永生實驗儀器廠)。Hirulog-S對照品(批號:20100304，經HPLC峰面積歸一化法計算純度≥99．65%)，新型抗凝血多肽Hirulog-S原料藥樣品(批號為20100301，20100302，20100303)均為成都圣諾生物制藥有限公司產品;新型抗凝血多肽Hirulog-S凍干劑樣品(生物工程研究所，批號為20100901、20100902、20100903，每瓶凍干劑含Hirulog-S25mg，甘露醇12．5mg，凍干前用0．5mol/L碳酸鈉調節pH值至5．1～5．5)。乙腈(Fisher公司)，甲醇(Honeywell公司)，TFA(Acros公司，純度為99%)均為色譜純，磷酸和濃氨水及其他試劑均為市售分析純，去離子水(自制)。

2方法與結果

2．1影響因素實驗

2．1．1光照實驗原料藥(批號:20100303)及凍干劑樣品(批號:20100902)置于敞口西林瓶并放入藥品穩定性試驗箱。凍干劑樣品取2瓶，樣品暴露放置于藥品穩定性試驗箱，光照強度5000±500LUX(溫度25℃)放置10d，于第0、5、10天時取樣，考察其含量及有關物質變化(水份含量及三氟乙酸含量未計，下同)。結果表明，Hirulog-S原料藥對光穩定，含量及有關物質均無明顯變化;Hirulog-S凍干劑的含量在第10天略有下降，有少量雜質產生，建議避光保存。

2．1．2高溫實驗同前取樣，置于藥品穩定性試驗箱，分別于40、60℃放置10d，于0、5、10d時取樣，考察其含量及有關物質變化。結果表明，Hirulog-S原料藥在高溫條件下穩定，Hirulog-S凍干劑在40℃高溫條件下穩定，含量無明顯變化，在60℃高溫條件下含量略有下降，有少量雜質產生，結果見表2、表3。

2．1．3高濕實驗同前取樣，置于藥品穩定性試驗箱，分別于相對濕度(RH)75%、RH92．5%(溫度25℃)放置10d，于0、5、10d時取樣，考察其含量及有關物質變化。結果表明，Hirulog-S原料藥及凍干劑在高濕條件下穩定，結果見表4、表5。

2．2加速實驗3批原料藥樣品(批號:20100301、20100302、20100303)及3批凍干劑樣品(批號:20100901、20100902、20100903)模擬上市包裝，置于RH75%、40℃條件的藥品穩定性試驗箱中放置6個月，于第0，1，2，3，6個月取樣，考察其含量及有關物質變化。結果表明，Hirulog-S原料藥及凍干劑均較為穩定，6個月加速實驗含量沒有顯著變化(表6)。

2．3長期試驗3批原料藥樣品(批號:20100301，20100302，20100303)模擬上市包裝，置于室溫和4℃冰箱中避光保存，定期取樣分析;3批凍干劑樣品(批號:20100901，20100902，20100903)模擬上市包裝，置于4℃冰箱中避光保存，定期取樣分析(表7、表8)。結果表明，Hirulog-S原料藥在室溫及4℃條件下放置2年穩定，含量無明顯變化，3年后含量略有下降;Hirulog-S凍干劑在4℃條件下放置2年穩定，含量無明顯變化。

3討論

本研究采用HPLC方法學分析Hirulog-S原料藥及凍干劑樣品［6］，該法快速簡便，結果準確可靠，重復性好。影響因素實驗研究結果表明，Hirulog-S對光照、溫度(40℃)及濕度穩定(吸濕除外)。6個月加速實驗及長期留樣考察實驗表明，Hirulog-S原料藥及其凍干劑針劑穩定性很好，該藥原料藥在室溫下儲存有效期達2年以上。該藥凍干粉在4℃避光保存條件下有效期可達2年以上。一般來說，多肽類藥物穩定性不好，需要低溫保存(如4℃)。然而Hirulog-S的原料藥不僅在4℃條件下長期保存十分穩定，且在室溫下保存2年也十分穩定，其含量及有關物質變化與4℃保存的結果差別不大，這在多肽藥物中非常少見，這一特性使其儲存十分方便，減少了儲存及運輸成本。

【參考文獻】

［1］戴秋云，黃園園，董銘心，等．一類抗凝血多肽及其用途:中國，ZL200710120685［P］．2011－03－23，InternationalPCTPa-tentApplicationNumber:PCT/CN2008/001881，2010－05－20．

［2］YuZ，HuangYY，WangY，etal．Constructionandcharacteriza-tionofnovelhirulogvariantswithantithrombinandantiplateletfunctions［J］．ProtPepLett，2014，21(1):69－74．

［3］MalikN，GershlickAH．Theclinicalandeconomicimpactofbivalirudinforpercutaneouscoronaryintervention［J］．ExpertRevPharmacoeconOutcomesRes，2013，13(6):699－706．

［4］ScholleJM，WhiteCM．Bivalirudin:areviewofpharmacologyandtherapeuticuse［J］．ConnMed，2010，74(10):595－597．

［5］張艷，韓國柱，呂莉，等．新型合成水蛭肽Hirulog-s抗家兔彌散性血管內凝血的作用［J］．中國新藥雜志，2012，21(6):611－615．

［6］LiuZG，YuZ，HuangYY，etal．Anovelstearicacid-modifiedhirudinpeptidomimeticwithimprovedpharmacokineticpropertiesandanticoagulantactivity［J］．SciReports，2015，5:14349．

［7］郭會芹，王于，付超，等．新型抗凝血多肽Hirulog-S的質量分析［J］．藥物分析雜志，2011，31(10):1930－1933．

［8］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典2010年版二部附錄ⅤD高效液相色譜法［S］．北京:中國醫藥科技出版社，2010:29－30．

［9］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典2010年版二部附錄ⅪⅩC原料藥與藥物制劑穩定性試驗指導原則［S］．北京:中國醫藥科技出版社，2010:199－200

作者：余碩 郭會芹 董銘心 戴秋云 單位：軍事醫學科學院生物工程研究所