抗凝血多肽Hirulog-S的穩(wěn)定性研究范文

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《軍事醫(yī)學(xué)雜志》2015年第十二期

［摘要］

目的考察抗凝血多肽hirulog-s原料藥及凍干劑的穩(wěn)定性，為該藥臨床應(yīng)用及保存條件的制定奠定基礎(chǔ)。方法采用高效液相色譜法，通過影響因素實(shí)驗(yàn)、加速實(shí)驗(yàn)和長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)測(cè)定Hirulog-S原料藥及凍干劑的含量及有關(guān)物質(zhì)的變化。結(jié)果影響因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，溫度、濕度對(duì)Hirulog-S原料藥、凍干劑的含量及有關(guān)物質(zhì)變化影響不大;加速實(shí)驗(yàn)(40℃，RH75%)、24個(gè)月室溫及4℃長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)顯示，Hirulog-S原料藥及凍干劑含量及有關(guān)物質(zhì)均無顯著變化。結(jié)論Hirulog-S原料藥及凍干劑具有較高穩(wěn)定性，原料藥室溫避光密封保存、凍干粉4℃避光密封保存，暫定有效期2年。

［關(guān)鍵詞］

抗凝劑;硬脂酸鏈修飾多肽;Hirulog-S;穩(wěn)定性;色譜法，高壓液相

Hirulog-S［序列:D-FPRP-GK(stearicacid)GG-QGDFEPIPEDAYDE-NH2］是本實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的新型抗凝血多肽，含有修飾的硬脂酸側(cè)鏈［1］。與臨床藥物比伐盧定(bivatrudin，Hirulog-1，D-FPRPGGGGNGDFEE-IPEEYL)相比具有顯著優(yōu)點(diǎn)［2～6］:①Hirulog-S的體內(nèi)抗凝活性為現(xiàn)有抗凝藥物比伐盧定的10倍以上，半衰期適中(3．5h，Hirulog-1為16min)，且作用平緩，不造成APTT高峰，出血性小;②不良反應(yīng)低，小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)表明，Hirulog-S高于有效劑量100～200倍未發(fā)現(xiàn)明顯毒性癥狀，腦、臟器等未出現(xiàn)異常或出血現(xiàn)象;③1～2次/d靜脈注射就可保持很高的抗凝活性，用量?jī)H為比伐盧定的1/10，能克服比伐盧定用量大(250mg/瓶)、藥物峰值濃度高、半衰期短、連續(xù)靜脈注射的缺點(diǎn)。本研究基于前期建立的Hirulog-S質(zhì)量分析方法［7］以及《中國(guó)藥典》2010年版［8，9］，研究其原料藥、凍干劑的穩(wěn)定性，為其臨床應(yīng)用制定保存條件。

1儀器與試劑

Agilent1200高效液相色譜系統(tǒng)，ChemStationB．04．02處理軟件(安捷倫科技有限公司)。pH計(jì)(PE-10)、CP324S電子天平(德國(guó)Sartorius)，VotexGenie1振蕩器(美國(guó)ScientificIndustries)，Alpha-2LD凍干機(jī)(CHRIST)，SHH-GSD系列綜合藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱(重慶市永生實(shí)驗(yàn)儀器廠)。Hirulog-S對(duì)照品(批號(hào):20100304，經(jīng)HPLC峰面積歸一化法計(jì)算純度≥99．65%)，新型抗凝血多肽Hirulog-S原料藥樣品(批號(hào)為20100301，20100302，20100303)均為成都圣諾生物制藥有限公司產(chǎn)品;新型抗凝血多肽Hirulog-S凍干劑樣品(生物工程研究所，批號(hào)為20100901、20100902、20100903，每瓶?jī)龈蓜┖琀irulog-S25mg，甘露醇12．5mg，凍干前用0．5mol/L碳酸鈉調(diào)節(jié)pH值至5．1～5．5)。乙腈(Fisher公司)，甲醇(Honeywell公司)，TFA(Acros公司，純度為99%)均為色譜純，磷酸和濃氨水及其他試劑均為市售分析純，去離子水(自制)。

2方法與結(jié)果

2．1影響因素實(shí)驗(yàn)

2．1．1光照實(shí)驗(yàn)原料藥(批號(hào):20100303)及凍干劑樣品(批號(hào):20100902)置于敞口西林瓶并放入藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱。凍干劑樣品取2瓶，樣品暴露放置于藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱，光照強(qiáng)度5000±500LUX(溫度25℃)放置10d，于第0、5、10天時(shí)取樣，考察其含量及有關(guān)物質(zhì)變化(水份含量及三氟乙酸含量未計(jì)，下同)。結(jié)果表明，Hirulog-S原料藥對(duì)光穩(wěn)定，含量及有關(guān)物質(zhì)均無明顯變化;Hirulog-S凍干劑的含量在第10天略有下降，有少量雜質(zhì)產(chǎn)生，建議避光保存。

2．1．2高溫實(shí)驗(yàn)同前取樣，置于藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱，分別于40、60℃放置10d，于0、5、10d時(shí)取樣，考察其含量及有關(guān)物質(zhì)變化。結(jié)果表明，Hirulog-S原料藥在高溫條件下穩(wěn)定，Hirulog-S凍干劑在40℃高溫條件下穩(wěn)定，含量無明顯變化，在60℃高溫條件下含量略有下降，有少量雜質(zhì)產(chǎn)生，結(jié)果見表2、表3。

2．1．3高濕實(shí)驗(yàn)同前取樣，置于藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱，分別于相對(duì)濕度(RH)75%、RH92．5%(溫度25℃)放置10d，于0、5、10d時(shí)取樣，考察其含量及有關(guān)物質(zhì)變化。結(jié)果表明，Hirulog-S原料藥及凍干劑在高濕條件下穩(wěn)定，結(jié)果見表4、表5。

2．2加速實(shí)驗(yàn)3批原料藥樣品(批號(hào):20100301、20100302、20100303)及3批凍干劑樣品(批號(hào):20100901、20100902、20100903)模擬上市包裝，置于RH75%、40℃條件的藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱中放置6個(gè)月，于第0，1，2，3，6個(gè)月取樣，考察其含量及有關(guān)物質(zhì)變化。結(jié)果表明，Hirulog-S原料藥及凍干劑均較為穩(wěn)定，6個(gè)月加速實(shí)驗(yàn)含量沒有顯著變化(表6)。

2．3長(zhǎng)期試驗(yàn)3批原料藥樣品(批號(hào):20100301，20100302，20100303)模擬上市包裝，置于室溫和4℃冰箱中避光保存，定期取樣分析;3批凍干劑樣品(批號(hào):20100901，20100902，20100903)模擬上市包裝，置于4℃冰箱中避光保存，定期取樣分析(表7、表8)。結(jié)果表明，Hirulog-S原料藥在室溫及4℃條件下放置2年穩(wěn)定，含量無明顯變化，3年后含量略有下降;Hirulog-S凍干劑在4℃條件下放置2年穩(wěn)定，含量無明顯變化。

3討論

本研究采用HPLC方法學(xué)分析Hirulog-S原料藥及凍干劑樣品［6］，該法快速簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好。影響因素實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，Hirulog-S對(duì)光照、溫度(40℃)及濕度穩(wěn)定(吸濕除外)。6個(gè)月加速實(shí)驗(yàn)及長(zhǎng)期留樣考察實(shí)驗(yàn)表明，Hirulog-S原料藥及其凍干劑針劑穩(wěn)定性很好，該藥原料藥在室溫下儲(chǔ)存有效期達(dá)2年以上。該藥凍干粉在4℃避光保存條件下有效期可達(dá)2年以上。一般來說，多肽類藥物穩(wěn)定性不好，需要低溫保存(如4℃)。然而Hirulog-S的原料藥不僅在4℃條件下長(zhǎng)期保存十分穩(wěn)定，且在室溫下保存2年也十分穩(wěn)定，其含量及有關(guān)物質(zhì)變化與4℃保存的結(jié)果差別不大，這在多肽藥物中非常少見，這一特性使其儲(chǔ)存十分方便，減少了儲(chǔ)存及運(yùn)輸成本。

【參考文獻(xiàn)】

［1］戴秋云，黃園園，董銘心，等．一類抗凝血多肽及其用途:中國(guó)，ZL200710120685［P］．2011－03－23，InternationalPCTPa-tentApplicationNumber:PCT/CN2008/001881，2010－05－20．

［2］YuZ，HuangYY，WangY，etal．Constructionandcharacteriza-tionofnovelhirulogvariantswithantithrombinandantiplateletfunctions［J］．ProtPepLett，2014，21(1):69－74．

［3］MalikN，GershlickAH．Theclinicalandeconomicimpactofbivalirudinforpercutaneouscoronaryintervention［J］．ExpertRevPharmacoeconOutcomesRes，2013，13(6):699－706．

［4］ScholleJM，WhiteCM．Bivalirudin:areviewofpharmacologyandtherapeuticuse［J］．ConnMed，2010，74(10):595－597．

［5］張艷，韓國(guó)柱，呂莉，等．新型合成水蛭肽Hirulog-s抗家兔彌散性血管內(nèi)凝血的作用［J］．中國(guó)新藥雜志，2012，21(6):611－615．

［6］LiuZG，YuZ，HuangYY，etal．Anovelstearicacid-modifiedhirudinpeptidomimeticwithimprovedpharmacokineticpropertiesandanticoagulantactivity［J］．SciReports，2015，5:14349．

［7］郭會(huì)芹，王于，付超，等．新型抗凝血多肽Hirulog-S的質(zhì)量分析［J］．藥物分析雜志，2011，31(10):1930－1933．

［8］國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅤD高效液相色譜法［S］．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:29－30．

［9］國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅪⅩC原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則［S］．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:199－200

作者：余碩 郭會(huì)芹 董銘心 戴秋云 單位：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所