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《承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)》2016年第4期
摘要:
目的:采用高效液相色譜法測(cè)定不同廠家益心酮片中牡荊素葡萄糖苷等6種成分的含量。方法:采用HPLC法，色譜柱為AgilentZORBAXSB-C18(4.6mm×250mm，5μm);流動(dòng)相:0.1%甲酸溶液-乙腈-四氫呋喃梯度洗脫;流速1.0ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)350nm;柱溫30℃;進(jìn)樣量10μl。結(jié)果:綠原酸、牡荊素葡萄糖苷、牡荊素鼠李糖苷、牡荊素、蘆丁和金絲桃苷的線性范圍分別是12.5-400、25-800、31.25-1000、9.38-300、2.50-80和9.38-300μg/ml，加樣回收率為99.3%-100.6%(RSD＜2.0%)。結(jié)論:不同廠家益心酮片中6種成分的含量差異較大(RSD:36.90-71.43%），提高中藥的質(zhì)量控制具有重要意義。
關(guān)鍵詞:
益心酮片;含量測(cè)定;HPLC
益心酮片是以山楂葉提取物為原料制成的中成藥制劑，收載于《中國(guó)藥典》2015年版一部，具有活血化瘀、宣通血脈的功效[1]。山楂葉是薔薇科植物山楂CrataeguspinnatifidaBge.的干燥葉，夏秋二季采收，具有活血化瘀、理氣通脈、化濁降脂的作用，主要含黃酮類和有機(jī)酸類成分[2-3]。2015年版《中國(guó)藥典》采用HPLC法僅測(cè)定了益心酮片中牡荊素葡萄糖苷的含量，基于中藥多成分、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)，多指標(biāo)成分同時(shí)測(cè)定的質(zhì)量評(píng)價(jià)模式能更全面反應(yīng)中藥的質(zhì)量。為此，本研究在文獻(xiàn)[4-5]的基礎(chǔ)上采用RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定益心酮片中牡荊素鼠李糖苷、牡荊素葡萄糖苷、牡荊素、蘆丁、金絲桃苷和綠原酸6種成分的含量，以期為進(jìn)一步提高益心酮片的質(zhì)量提供依據(jù)。
1儀器與試藥
1.1儀器
Agilent1200Series高效液相色譜儀(G1311A四元泵、G1329A自動(dòng)進(jìn)樣器、G1322A在線脫氣機(jī)、G1316A柱溫箱、G1315D二極管陣列檢測(cè)器)，AgilentChemstation色譜工作站，KQ-700型超聲波清洗器，HC-2062高速離心機(jī)，AG-245型十萬(wàn)分之一電子分析天平。
1.2試藥
對(duì)照品牡荊素鼠李糖苷(111668-200602）、牡荊素(111687-200602）、蘆丁(100080-200707）、金絲桃苷(111521-201004）、綠原酸(110753-200413），中國(guó)藥品生物制品檢定所(供含量測(cè)定用）;對(duì)照品牡荊素葡萄糖苷(A0513），成都曼思特生物科技有限公司(純度＞99%）。乙腈(FisherScientific，USA）、四氫呋喃(MredaTechnologyInc，USA），色譜純;水，娃哈哈純凈水;其他試劑均為分析純。
1.3益心酮片
益心酮片共18批:山西省恒山中藥有限責(zé)任公司5批，山西振東泰盛制藥有限公司4批，海南天煌制藥有限公司3批，山西昂生藥業(yè)有限責(zé)任公司3批，湖南方勝制藥股份有限公司3批。
2方法與結(jié)果
2.1色譜條件
色譜柱:AgilentZORBAXSB-C18(4.6mm×250mm，5μm）;流動(dòng)相:0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈(B）-四氫呋喃(C），梯度洗脫(程序見(jiàn)表1);檢測(cè)波長(zhǎng)350nm;柱溫30℃;流速1.0ml/min;進(jìn)樣量10μl。供試品溶液色譜圖見(jiàn)附圖。
2.2溶液的制備
2.2.1對(duì)照品溶液的制備:精密稱取牡荊素葡萄糖苷、牡荊素鼠李糖苷、牡荊素、蘆丁、金絲桃苷和綠原酸適量，用甲醇制成每ml含牡荊素葡萄糖苷0.80mg、牡荊素鼠李糖苷1.00mg、牡荊素0.3mg、蘆丁0.08mg、金絲桃苷0.3mg、綠原酸0.4mg的混合對(duì)照品溶液。
2.2.2供試品溶液的制備:精密稱定益心酮片0.3g，置25ml量瓶，用70%甲醇定容，稱定重量，超聲提取20min，用70%甲醇補(bǔ)足失重，過(guò)濾，取續(xù)濾液離心10min(12000r/min），上清液用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。
2.3方法學(xué)考察
2.3.1線性關(guān)系考察:精密量取2.2.1中的混合對(duì)照品溶液5ml置10ml量瓶，甲醇定容，搖勻，作為2號(hào)溶液，按倍比稀釋法制備3、4、5、6號(hào)溶液。取系列溶液分別進(jìn)樣10μl，按2.1的色譜條件測(cè)定峰面積，以濃度(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見(jiàn)表2:
2.3.2精密度試驗(yàn):精密吸取2號(hào)混合對(duì)照品溶液10μl，按2.1的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算6種成分的峰面積，RSD均＜2.0%，說(shuō)明儀器精密度良好。
2.3.3重復(fù)性試驗(yàn):取批號(hào)131101益心酮片6份，每份0.3g，按2.2.2的方法制備供試品溶液，按2.1的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算6種成分的含量，RSD均＜2.0%，表明方法重復(fù)性良好。
2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn):取批號(hào)131101益心酮片供試品溶液，按2.1的色譜條件分別在0、4、8、12、16、24h進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算6種成分的含量，RSD均＜2.0%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。
2.3.5加樣回收率試驗(yàn):取已知含量的益心酮片(山西省恒山中藥有限責(zé)任公司，批號(hào)131101）6份，每份0.15g，精密稱定，分別精密加入對(duì)照品適量，按2.2.2的方法制備供試品溶液，按2.1的色譜條件測(cè)定，結(jié)果6種成分的平均回收率分別為:100.4%、100.0%、100.6%、99.9%、100.6%、99.3%，RSD均＜2.0%。
2.4含量測(cè)定
分別精密稱取實(shí)驗(yàn)用18批益心酮片，按2.2.2的方法制備供試品溶液，按2.1的色譜條件分別測(cè)定益心酮片中6種成分的含量，結(jié)果見(jiàn)表3:不同廠家益心酮片中6種成分的含量差異較大(RSD:36.90-71.43%）。
3討論
本研究應(yīng)用的是常規(guī)高效液相色譜法，為了保證6種成分含量測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，色譜條件的優(yōu)化是關(guān)鍵，實(shí)驗(yàn)前期對(duì)檢測(cè)波長(zhǎng)、流動(dòng)相的組成和比例、色譜柱進(jìn)行了系統(tǒng)考察，本研究所采用的色譜條件保證了主要成分峰的數(shù)目和良好的分離度。本研究同時(shí)測(cè)定了18批益心酮片成品中6種成分的含量，結(jié)果顯示不同廠家益心酮片中6種成分的含量相差較大(RSD:36.90-71.43%），可能是由于不同產(chǎn)地的藥材或是生產(chǎn)過(guò)程中的工藝差別所導(dǎo)致的。因此，提高中藥的質(zhì)量控制具有重要意義。
參考文獻(xiàn)：
[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部）[S].2015年版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015.1402.
[2]郭琦麗，呂武清.山楂葉的研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥業(yè)，2007，16(22):60-62.
[3]耿慧春，滿瑩，趙智勇.山楂葉化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2009，47(26):12-13.
[4]潘海峰，王領(lǐng)弟，李艷榮，等.HPLC測(cè)定山楂葉7種成分的含量[J].中藥材，2012，35(6):925-927.
[5]于淼，原源.HPLC法測(cè)定益心酮片中四種黃酮類成分的含量[J].東南國(guó)防醫(yī)藥，2015，17(2）:157-159，165.
作者:楊明宇 王領(lǐng)弟 杜義龍 趙勝男 李艷榮 潘海峰 單位:河北省中藥研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所 承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科