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《承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)》2016年第4期
摘要:
目的:采用高效液相色譜法測定不同廠家益心酮片中牡荊素葡萄糖苷等6種成分的含量。方法:采用HPLC法,色譜柱為AgilentZORBAXSB-C18(4.6mm×250mm,5μm);流動相:0.1%甲酸溶液-乙腈-四氫呋喃梯度洗脫;流速1.0ml/min;檢測波長350nm;柱溫30℃;進(jìn)樣量10μl。結(jié)果:綠原酸、牡荊素葡萄糖苷、牡荊素鼠李糖苷、牡荊素、蘆丁和金絲桃苷的線性范圍分別是12.5-400、25-800、31.25-1000、9.38-300、2.50-80和9.38-300μg/ml,加樣回收率為99.3%-100.6%(RSD<2.0%)。結(jié)論:不同廠家益心酮片中6種成分的含量差異較大(RSD:36.90-71.43%),提高中藥的質(zhì)量控制具有重要意義。
關(guān)鍵詞:
益心酮片;含量測定;HPLC
益心酮片是以山楂葉提取物為原料制成的中成藥制劑,收載于《中國藥典》2015年版一部,具有活血化瘀、宣通血脈的功效[1]。山楂葉是薔薇科植物山楂CrataeguspinnatifidaBge.的干燥葉,夏秋二季采收,具有活血化瘀、理氣通脈、化濁降脂的作用,主要含黃酮類和有機(jī)酸類成分[2-3]。2015年版《中國藥典》采用HPLC法僅測定了益心酮片中牡荊素葡萄糖苷的含量,基于中藥多成分、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn),多指標(biāo)成分同時(shí)測定的質(zhì)量評價(jià)模式能更全面反應(yīng)中藥的質(zhì)量。為此,本研究在文獻(xiàn)[4-5]的基礎(chǔ)上采用RP-HPLC法同時(shí)測定益心酮片中牡荊素鼠李糖苷、牡荊素葡萄糖苷、牡荊素、蘆丁、金絲桃苷和綠原酸6種成分的含量,以期為進(jìn)一步提高益心酮片的質(zhì)量提供依據(jù)。
1儀器與試藥
1.1儀器
Agilent1200Series高效液相色譜儀(G1311A四元泵、G1329A自動進(jìn)樣器、G1322A在線脫氣機(jī)、G1316A柱溫箱、G1315D二極管陣列檢測器),AgilentChemstation色譜工作站,KQ-700型超聲波清洗器,HC-2062高速離心機(jī),AG-245型十萬分之一電子分析天平。
1.2試藥
對照品牡荊素鼠李糖苷(111668-200602)、牡荊素(111687-200602)、蘆丁(100080-200707)、金絲桃苷(111521-201004)、綠原酸(110753-200413),中國藥品生物制品檢定所(供含量測定用);對照品牡荊素葡萄糖苷(A0513),成都曼思特生物科技有限公司(純度>99%)。乙腈(FisherScientific,USA)、四氫呋喃(MredaTechnologyInc,USA),色譜純;水,娃哈哈純凈水;其他試劑均為分析純。
1.3益心酮片
益心酮片共18批:山西省恒山中藥有限責(zé)任公司5批,山西振東泰盛制藥有限公司4批,海南天煌制藥有限公司3批,山西昂生藥業(yè)有限責(zé)任公司3批,湖南方勝制藥股份有限公司3批。
2方法與結(jié)果
2.1色譜條件
色譜柱:AgilentZORBAXSB-C18(4.6mm×250mm,5μm);流動相:0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)-四氫呋喃(C),梯度洗脫(程序見表1);檢測波長350nm;柱溫30℃;流速1.0ml/min;進(jìn)樣量10μl。供試品溶液色譜圖見附圖。
2.2溶液的制備
2.2.1對照品溶液的制備:精密稱取牡荊素葡萄糖苷、牡荊素鼠李糖苷、牡荊素、蘆丁、金絲桃苷和綠原酸適量,用甲醇制成每ml含牡荊素葡萄糖苷0.80mg、牡荊素鼠李糖苷1.00mg、牡荊素0.3mg、蘆丁0.08mg、金絲桃苷0.3mg、綠原酸0.4mg的混合對照品溶液。
2.2.2供試品溶液的制備:精密稱定益心酮片0.3g,置25ml量瓶,用70%甲醇定容,稱定重量,超聲提取20min,用70%甲醇補(bǔ)足失重,過濾,取續(xù)濾液離心10min(12000r/min),上清液用0.45μm微孔濾膜過濾,取續(xù)濾液,即得。
2.3方法學(xué)考察
2.3.1線性關(guān)系考察:精密量取2.2.1中的混合對照品溶液5ml置10ml量瓶,甲醇定容,搖勻,作為2號溶液,按倍比稀釋法制備3、4、5、6號溶液。取系列溶液分別進(jìn)樣10μl,按2.1的色譜條件測定峰面積,以濃度(X)為橫坐標(biāo),峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,結(jié)果見表2:
2.3.2精密度試驗(yàn):精密吸取2號混合對照品溶液10μl,按2.1的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次,計(jì)算6種成分的峰面積,RSD均<2.0%,說明儀器精密度良好。
2.3.3重復(fù)性試驗(yàn):取批號131101益心酮片6份,每份0.3g,按2.2.2的方法制備供試品溶液,按2.1的色譜條件進(jìn)行測定,計(jì)算6種成分的含量,RSD均<2.0%,表明方法重復(fù)性良好。
2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn):取批號131101益心酮片供試品溶液,按2.1的色譜條件分別在0、4、8、12、16、24h進(jìn)樣測定,計(jì)算6種成分的含量,RSD均<2.0%,表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。
2.3.5加樣回收率試驗(yàn):取已知含量的益心酮片(山西省恒山中藥有限責(zé)任公司,批號131101)6份,每份0.15g,精密稱定,分別精密加入對照品適量,按2.2.2的方法制備供試品溶液,按2.1的色譜條件測定,結(jié)果6種成分的平均回收率分別為:100.4%、100.0%、100.6%、99.9%、100.6%、99.3%,RSD均<2.0%。
2.4含量測定
分別精密稱取實(shí)驗(yàn)用18批益心酮片,按2.2.2的方法制備供試品溶液,按2.1的色譜條件分別測定益心酮片中6種成分的含量,結(jié)果見表3:不同廠家益心酮片中6種成分的含量差異較大(RSD:36.90-71.43%)。
3討論
本研究應(yīng)用的是常規(guī)高效液相色譜法,為了保證6種成分含量測定結(jié)果的準(zhǔn)確性,色譜條件的優(yōu)化是關(guān)鍵,實(shí)驗(yàn)前期對檢測波長、流動相的組成和比例、色譜柱進(jìn)行了系統(tǒng)考察,本研究所采用的色譜條件保證了主要成分峰的數(shù)目和良好的分離度。本研究同時(shí)測定了18批益心酮片成品中6種成分的含量,結(jié)果顯示不同廠家益心酮片中6種成分的含量相差較大(RSD:36.90-71.43%),可能是由于不同產(chǎn)地的藥材或是生產(chǎn)過程中的工藝差別所導(dǎo)致的。因此,提高中藥的質(zhì)量控制具有重要意義。
參考文獻(xiàn):
[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].2015年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015.1402.
[2]郭琦麗,呂武清.山楂葉的研究進(jìn)展[J].中國藥業(yè),2007,16(22):60-62.
[3]耿慧春,滿瑩,趙智勇.山楂葉化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生,2009,47(26):12-13.
[4]潘海峰,王領(lǐng)弟,李艷榮,等.HPLC測定山楂葉7種成分的含量[J].中藥材,2012,35(6):925-927.
[5]于淼,原源.HPLC法測定益心酮片中四種黃酮類成分的含量[J].東南國防醫(yī)藥,2015,17(2):157-159,165.
作者:楊明宇 王領(lǐng)弟 杜義龍 趙勝男 李艷榮 潘海峰 單位:河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所 承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科