帕瑞昔布鈉位置異構體測定研究范文

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《成都大學學報》2016年第2期

摘要:

建立以高效液相色譜法(HPLC)測定帕瑞昔布鈉位置異構體的方法．以硅烷鍵合硅膠為填充劑;以正己烷—異丙醇(85∶15)為流動相，流速，1.0mL/min，柱溫，30℃，檢測波長，215nm．實驗表明，帕瑞昔布鈉與位置異構體分離度為1.86，理論塔板數分別為8041和8929;在0.04μg/mL～0.64μg/mL范圍內，帕瑞昔布鈉異構體線性關系良好(A=70.647c－1.401，r=0.9998);重復性良好(RSD為0.12%);平均回收率為94.47%(RSD為3.03%，n=9)．采用HPLC法測定帕瑞昔布鈉中的位置異構體，操作簡單，準確度高且靈敏度好，可為控制帕瑞昔布鈉質量提供依據．

關鍵詞:

高效液相色譜法;雜質檢測;帕瑞昔布鈉;位置異構體

0引言

帕瑞昔布鈉的化學名為N-［［4-(5-甲基-3-苯基-4-異惡唑基)苯基］磺酰基］丙酰胺鈉，分子式為C19H17N2O4SNa，分子量為392.41，其化學結構式如圖1所示．帕瑞昔布鈉是一種人工合成藥物［1］，其對骨科、外科、婦科等臨床各科患者術后鎮痛有良好的效果，副作用較小［2－6］．帕瑞昔布鈉中位置異構體是帕瑞昔布鈉的構造異構(位置異構)體，是本品合成第一步磺化過程中在苯環上產生的間位異構，主要是苯環間位結構化合物N-［3-(5-甲基-3-苯基-4-異惡唑基)苯基］磺酰胺，其化學結構式如圖2所示．由于功能團位置的不同，其生物活性也可能不同，本研究參考《中國藥典》2010年版二部附錄［7］，利用HPLC分析能將帕瑞昔布鈉與其位置異構體進行有效分離的檢測條件，并初步確定測定帕瑞昔布鈉位置異構體的方法，通過對其他批次樣品中的位置異構體含量的測定，進而對該方法進行方法學驗證．本方法操作簡單，準確度高且靈敏度好，可為控制帕瑞昔布鈉質量提供依據．

1儀器與試藥

1.1儀器

實驗所用儀器包括:奧泰SSI-1500型高效液相色譜儀(美國，AIITECH);UV-759CRT型紫外—可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司);BP-210D型電子分析天平(德國，Sartorius);KH-5200E型超聲波清洗器(頻率40kHz，超聲時長15min，上海滬粵明科學儀器有限公司)．

1.2試藥

帕瑞昔布鈉位置異構體對照品，成都克萊蒙醫藥科技有限公司自制(批號，ZI130701);帕瑞昔布鈉(研究用批號，130801，含量測定批號，130903、130904、130905、131101、131102、131103);正己烷、異丙醇(Merk)，色譜純．

2方法與結果

2．1色譜條件

實驗的色譜條件為:色譜柱，硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相，正己烷—異丙醇(85∶15);流速，1.0mL/min;柱溫，30℃;檢測波長，215nm;進樣量，10μL．

2．2溶液的制備

2．2．1對照品溶液

取帕瑞昔布鈉位置異構體對照品適量，加正己烷—異丙醇(50∶50)溶解并稀釋，制成每1mL約含帕瑞昔布鈉位置異構體0.8μg的溶液，制得對照品溶液．

2．2．2供試品溶液

取帕瑞昔布鈉適量，加正己烷—異丙醇(50∶50)溶解并稀釋制成每1mL約含帕瑞昔布鈉0.4mg的溶液，制得供試品溶液．

2．3系統適應性實驗與專屬性實驗

取帕瑞昔布鈉和帕瑞昔布鈉位置異構體對照品各適量，加正己烷—異丙醇(50∶50)溶解并稀釋，制成每1mL約含帕瑞昔布鈉0.4mg和帕瑞昔布鈉位置異構體0.8μg的溶液．在“2.1”項條件下測定，記錄色譜圖，結果見圖3．色譜圖顯示，帕瑞昔布鈉位置異構體、帕瑞昔布鈉依次出峰，分離度為1.86，理論塔板數分別為8929和8041，并且空白溶劑無干擾，均符合檢測要求．

2．4線性實驗

精密量取“2.2.1”項下的帕瑞昔布鈉位置異構體對照品溶液0.5、2、4、6、8mL，分別置于10mL量瓶中，用正己烷—異丙醇(50∶50)定溶，制成系列對照品溶液，搖勻，分別進樣10μL，以“2.1”項下條件注入液相色譜儀，記錄色譜圖．以峰面積A為縱坐標，相應濃度c為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程為，A=70.647c－1.401，r=0.9998．表明其在0.04～0.64μg/mL濃度范圍內線性關系良好．

2．5檢測限與定量

限取帕瑞昔布鈉異構體對照品適量，加正己烷—異丙醇(50∶50)溶解并稀釋，制成一定濃度的溶液．在“2.1”項條件下進樣，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖．若該色譜圖主峰峰高與空白基線相對應位置的基線噪音比值較大，則逐級稀釋供試品溶液，直至比值為10∶1時，注入儀器的量為定量限;當比值為3∶1時，注入儀器的量為檢測限．根據信噪比為3∶1和10∶1時的供試品濃度和進樣體積，計算出帕瑞昔布鈉異構體的檢測限和定量限分別為，0.23ng和0.52ng．

2．6重復性實驗

取帕瑞昔布鈉及帕瑞昔布鈉位置異構體對照品適量，共6份，分別加正己烷—異丙醇(50∶50)制成約每毫升含帕瑞昔布鈉0.4mg、帕瑞昔布鈉位置異構體0.8μg的供試品溶液，在“2.1”項條件下，連續進樣6次，記錄色譜圖．計算帕瑞昔布鈉峰面積的RSD為1.20%，帕瑞昔布鈉位置異構體峰面積的RSD為0.12%．結果表明，本方法進樣重復性良好．

2.7溶液穩定性實驗

精密量取“2.2”項下對照品溶液10μL在“2.1”項條件下，于0、2、4、6、8、24、48h時分別進樣，記錄色譜圖．結果對照品溶液峰面積的RSD為3.29%，表明對照品溶液在室溫下48h內穩定．精密量取“2.6”項下的1份供試品溶液10μL在“2.1”項條件下，于0、2、4、6、8、24、48h時分別進樣，記錄色譜圖．結果供試品溶液中帕瑞昔布鈉峰面積的RSD為4.04%，帕瑞昔布鈉位置異構體峰面積的RSD為0.68%，表明供試品溶液在室溫下48h內穩定．

2．8加樣回收率實驗

精密量取“2.2.2”項供試品溶液9份，分別加入不同量對照品儲備溶液(4.0μg/mL)，并用正己烷—異丙醇(50∶50)溶解并稀釋成濃度為80%、100%、120%的供試品溶液各3份．在“2.1”項條件下進樣，記錄色譜圖．按外標法計算得平均回收率為94.47%、RSD為3.03%(n=9)．

2．9耐用性實驗

分別調整流動相比例［(85+5)%正己烷］、流速［(1.0－0.4)mL/min］、波長［(215±5)nm］、柱溫［(30±5)℃］和色譜柱(Phenomenexsilica4.6×250mm，5μm)，考察本法的耐用性．結果顯示，色譜條件在上述范圍內的變化不影響測定結果．

2．10樣品中位置異構體含量的測定

取6批樣品，按“2.2.2”項配制成供試品溶液，分別取10μL，在“2.1”項條件下進樣，記錄色譜圖，檢測樣品中帕瑞昔布鈉位置異構體，結果均未檢出，結果見圖3～圖5．

3討論

3．1波長的選擇

取帕瑞昔布鈉與帕瑞昔布鈉位置異構體適量，分別用乙腈—水(40∶60)配置成每1mL含各物質約0.02mg的溶液，按照紫外—可見分光光度法［9］在200nm～400nm范圍內掃描，結果表明，帕瑞昔布鈉與帕瑞昔布鈉位置異構體具有不同的紫外特征峰，最大吸收波長略有差異，但均具有較大的紫外末端吸收，參考相關文獻，最終選擇波長215nm作為帕瑞昔布鈉中位置異構體含量測定的檢測波長．

3．2流動相的選擇

由于帕瑞昔布鈉位置異構體是帕瑞昔布鈉合成第一步磺化過程中在苯環上產生的間位異構，兩者極性比較相近，采用有關物質檢測條件下的反相液相色譜法不能有效地分離，因此采用正相液相色譜法對本品的異構體進行分離和檢查．以正己烷—異丙醇為流動相體系進行流動相的比例篩選．試驗考察了正己烷—異丙醇(50∶50)、正己烷—異丙醇(75∶25)、正己烷—異丙醇(85∶15)等流動相對帕瑞昔布鈉及位置異構體的分離效果．結果顯示，以正己烷—異丙醇(85∶15)為流動相時，帕瑞昔布鈉及位置異構體的峰分離完全，且出峰時間適宜，專屬性強．

3．3樣品溶解溶劑的選擇

實驗比較了以乙腈—水(40∶60)、乙腈—水(47∶53)、正己烷—異丙醇(50∶50)、正己烷—異丙醇(75∶25)、正己烷—異丙醇(85∶15)作為樣品溶解溶劑．結果顯示，正己烷—異丙醇(50∶50)對帕瑞昔布鈉及位置異構體的溶解性較好．

4結論

本研究采用高效液相色譜法，以硅烷鍵合硅膠為填充劑和正己烷—異丙醇(85∶15)為流動相，對帕瑞昔布鈉中的位置異構體進行了含量檢測．結果說明，本方法可有效的測定帕瑞昔布鈉的間位和對位異構體，為帕瑞昔布鈉的實際生產提供了理論依據．

參考文獻:

［1］劉超，葉小崢，彭顯峰，等．一種帕瑞昔布鈉的制備方法:201310259736．6［P］．2013－06－26．

［2］徐斌，喬寧．帕瑞昔布鈉超前鎮痛在骨科下肢手術中的應用［J］．南通大學學報(醫學版)，2011，31(6):457－458，461．

［3］朱美華，曾瓊，王寧，等．帕瑞昔布鈉對神經外科術后鎮痛及躁動的影響［J］．臨床麻醉學雜志，2011，27(10):976－978．

［4］林江海，徐韶怡，王萍．帕瑞昔布鈉用于無痛人工流產術的臨床觀察［J］．海峽藥學，2011，23(5):105－107．

［5］宋德玲．帕瑞昔布鈉在術后鎮痛中的應用進展［J］．黑龍江醫藥，2013，26(3):481－482．

［6］周敦，董紅華，金寧，等．選擇性COX-2抑制劑超前鎮痛對骨科圍手術期鎮痛的療效觀察［J］．實用骨科雜志，2011，17(11):1044－1046．

［7］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(二部)［S］．北京:中國醫藥科技出版社，2010．

作者:聶忠莉 郭兆元 曾吉 王曉玲 葉丁 張勇 郭瑞 單位:成都大學藥學與生物工程學院 成都大學四川抗生素工業研究所 成都克萊蒙醫藥科技有限公司