內濕證動物模型研究進程范文

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摘要：該文對目前常用的以“脾虛”為基礎而復制的內濕證動物模型，從脾虛濕困、脾虛濕盛、脾虛痰濕以及脾虛痰濁等幾個方面進行分析、歸納、總結，以期對今后的研究有所啟迪。

關鍵詞：脾虛；痰濕；內濕；動物模型

《黃帝內經(jīng)》認為濕邪分為外感和內生兩個方面，外感多是由于“天地濕氣”造成，而“恣食肥甘厚味”是造成濕自內生的主要原因。內濕與外濕從病因論雖截然不同，但兩者常相互招引，相兼為病。“內濕”即濕濁內生，是各種原因導致的水濕痰濁蓄積于體內所致，是水液代謝失調的產(chǎn)物。《素問•至真要大論篇》曰：“諸濕腫滿，皆屬于脾”。脾主運化水谷和水濕，脾惡濕，若脾氣素虛，或飲食不節(jié)，損傷脾氣或久病傷脾，或它臟之邪傳脾，使脾失健運，則谷反為滯、水反為濕，以致濕濁內生。《赤水玄珠》曰：“脾無留濕不生痰”，水濕停聚中焦，日久則聚濕生痰。所以體內痰與濕的產(chǎn)生無論是感之于外還是生之于內，皆與平素脾虛有關。目前內濕證動物模型的造模方法復雜多樣，現(xiàn)對以“脾虛”為基礎，模擬臨床病因病機建立的內濕證動物模型與內濕型病證結合動物模型，進行分析、歸納、總結，現(xiàn)綜述如下。

1單因素造模法

單因素造模法是以中醫(yī)基礎理論為指導，模擬臨床病因，只采用一種施加因素的造模方法。目前主要有根據(jù)“脾喜躁惡濕”“飲食自倍，腸胃乃傷”復制的病因模型。

1.1脾虛濕困模型

張六通等[1]用自制造模箱將濕度維持在90％以上，連續(xù)刺激12h/d，觀察108d，發(fā)現(xiàn)大鼠逐漸出現(xiàn)趾指關節(jié)腫大，足背皮膚水腫、破潰，大便不成形，精神萎靡，嗜臥懶動，毛發(fā)晦暗，粗糙等癥狀。章敏等[2]以相同上述方法保證濕度環(huán)境，在不同溫度下，連續(xù)刺激大鼠8h/d，5d后大鼠開始有足背水腫、糞便性狀改變的情況，連續(xù)30d后全部大鼠出現(xiàn)濕阻的癥狀及體征，指出該模型可以是一種較為穩(wěn)定、可靠的外濕致病動物模型。王菁等[3]通過人工調控不同濕度，對大鼠生存環(huán)境進行干預，發(fā)現(xiàn)外濕對機體腸道內環(huán)境有明顯的影響作用，濕度越大影響也越劇烈，指出與中醫(yī)理論“濕盛則濡瀉”的觀點不謀而合。圍繞“外濕”困脾，使脾氣漸虛，脾虛導致濕邪停滯，引動內濕。同一濕度不同溫度下與相同溫度不同濕度下，大鼠的發(fā)病情況都較為明顯的反映了“外濕”對中醫(yī)“脾”的影響，可以認為是根據(jù)脾的生理特性模擬“外濕”引動“內濕”的脾虛濕困動物模型。

1.2脾虛痰濕模型

劉濤等[4]在“肥白人多痰濕”理論的指導下，通過采用高脂飼料（由20%豬油、4%白糖、2%奶粉、1%膽固醇、73%普通飼料組成）連續(xù)喂養(yǎng)大鼠10周。結果大鼠體重明顯增加，運動遲緩，并具有肥胖、脂肪肝、高脂血癥及糖耐量異常等特點，認為符合中醫(yī)痰濕證的表現(xiàn)。孫健龍等[5]用高脂飼料（基礎飼料+20%雀巢全脂奶粉，10%豬油）造模大鼠4周后，再以健脾祛濕藥反證治療，繼續(xù)給藥4周。從宏觀的癥狀及體征和微觀的理化指標（以血清總膽固醇、甘油三酯明顯增高為主），綜合評價了大鼠符合脾虛痰濕證的表現(xiàn)。司原成等[6]以高脂飼料（配方：豬油32%，蔗糖9%，麥芽糖糊精16%，酪蛋白26%，纖維素6%，其他11%）誘導小鼠肥胖模型，根據(jù)乏力、食少納呆、便溏等主要脾虛指標對小鼠進行二次篩選，經(jīng)過8周成功建立了脾胃虛弱型肥胖小鼠模型。《素問•異法方宜論篇》曰：“其民華食而脂肥，故邪不能傷其形體，其病生于內。”祖國醫(yī)學把血脂異常歸屬“痰濕”“濁阻”范疇，其病位在血脈，脾虛運化功能不足、痰濁痹阻是血脂異常形成的基本病機。所以這種造模方法與西醫(yī)學的高脂血癥造模方法相同[7]，且有研究指出血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）升高可作為痰濁證微觀辨證的指標；血脂水平可作為判別治療痰濁證藥物療效和病程進退的微觀指標[8]。近年來在中醫(yī)藥實驗中，直接采用高脂飲食誘導痰濕證動物模型進行實驗研究的方法較為普遍[9-11]。

2復合因素造模法

中醫(yī)證的形成常涉及多個方面，所以為使模型更接近于臨床情況，采用復合因素造模能夠使其致病原理更加貼近臨床，從而保證模型的可靠性與穩(wěn)定性。

2.1脾虛濕盛模型

（1）濕邪困脾合并飲食不節(jié)法。張豐華等[12]維持90％左右濕度環(huán)境，通過每天控制大鼠睡眠時間影響情志，再結合單雙日分別冷水與豬油灌胃，以此進一步保證“脾虛水停”“濕盛”的癥狀。連續(xù)造模20d后，模型組大鼠體質量、飲食量均下降，大便濕重增加，尿量減少，腹圍指數(shù)升高，自發(fā)活動減少，將平胃散作為反證中藥，治療后可以促進癥狀的恢復。趙麗等[13]在長夏季節(jié)，通過單日豬油灌胃，雙日力竭跑步加喂甘藍的方法連續(xù)14d，之后再移置人工潮濕環(huán)境10d的方法，建立了小鼠脾虛生濕模型，指出外因與內因協(xié)同作用是機體濕盛致病的關鍵所在。（2）濕邪困脾合并勞倦過度法。邱賽紅等[14]將大鼠飼養(yǎng)于潮濕環(huán)境中，每日游泳15min后立即給予4℃水灌胃1次，連續(xù)5d大鼠即出現(xiàn)倦臥少動、進食及飲水量減少、大便溏、體質量下降的狀態(tài)以及胃腸推進率、血清胃泌素降低等，單味芳香化濕藥治療后，相關指標即得到改善。（3）飲食失節(jié)合并勞倦過度法。高潔等[15]使大鼠每日負重力竭游泳，同時以高脂低蛋白飼料喂養(yǎng)，連續(xù)造模60d。最終大鼠出現(xiàn)與中醫(yī)脾虛證癥狀相吻合的表現(xiàn)，且大鼠尿量明顯減少、皮膚組織含水量顯著升高，認為大鼠體內存在水液的潴留。崔寧等[16-17]以上述同樣方法連續(xù)造模6周，即建立了大鼠脾虛水濕不化證模型。根據(jù)中醫(yī)“兩虛相得，乃克其形”的理論以及濕邪致病的特點，一方面使動物處于潮濕的環(huán)境中，模擬外濕侵襲易引動內濕；另一方面通過大量運動消耗動物體力來耗其正氣或情志不遂致使氣機紊亂，來影響中焦脾胃氣機；灌胃冷水或豬油以及飼喂高脂飼料則是通過飲食不節(jié)來損傷脾胃，以使脾胃虛損，濕邪自內而生。

2.2寒濕困脾模型

寒濕中阻證又名太陰寒濕證，脾虛與寒濕癥狀共見為辨證主要依據(jù)。（1）苦寒攻下合并飲食不節(jié)法。樊新榮等[18]每日上午給予大鼠生大黃水（生大黃720g，加水煮沸0.5h，過濾，濃縮至200%的水煎液）灌胃，下午以精煉豬油灌胃，連續(xù)14d，模擬出了太陰病脾虛寒濕證的部分癥狀。（2）寒濕困脾合并飲食不節(jié)法。王常松等[19]每天將大鼠置于寒濕環(huán)境3h，每晚灌8℃、50%的熟面糊，日常均以高脂鼠料（20%豬油+0.5%膽固醇+79.5%普通飼料）飼養(yǎng)，造模時間21d，以胃苓湯干預治療反證。從病因造模、鼠外在表現(xiàn)、微觀指標、藥物反證四方面綜合分析，認為該動物模型在一定程度上反映了中醫(yī)寒濕困脾證的特點。（3）中西合并造模法。劉芳芳等[20]將大鼠飼養(yǎng)于潮濕環(huán)境，通過苦寒瀉下、力竭游泳和皮下注射利血平的方法，建立了脾陽虛加濕的復合模型。《醫(yī)原•內傷大要論》曰：“陽虛必生內寒，內寒必生內濕。”濕邪外感則脾陽虛衰，加之苦寒傷脾，內濕、外濕相互為病。

2.3脾胃濕熱

脾胃濕熱多以脘腹痞悶、頭肢困重、口苦黏膩、厭惡油膩、不思飲食、舌紅苔黃膩、脈濡數(shù)為主要表現(xiàn)。（1）高溫高濕合并生物因素法。吳仕九等[21]給予大鼠高脂高糖養(yǎng)10d，再放入高溫、高濕環(huán)境中，于96、120h后灌胃鼠傷寒沙門氏菌，然后移出至自然環(huán)境。結果主要癥狀及體征、病變臟腑以及發(fā)病條件等均近似于中醫(yī)濕熱證型，且具有操作簡單、重復性好的特點。（2）高糖高脂加白酒法。呂冠華等[22]以普通飼料加兌蜂蜜水喂養(yǎng)，隔日灌服油脂與白酒共10d，然后將大鼠放入人工氣候箱5d。將白酒作為濕熱邪氣，認為既符合脾胃濕熱證臨床發(fā)病規(guī)律，也與脾胃濕熱證中脾胃功能失調表現(xiàn)突出而外感發(fā)熱的證候較輕的特點一致。薛生白《濕熱病篇》指出：“太陰內傷，濕飲停聚，客邪再至，內外相引，故病濕熱。”脾虛則生內濕，內濕停滯，郁久則化熱。

2.4脾虛痰濁模型

王英等[23]在脾虛痰濁證造模時給予大鼠單日精煉豬油灌胃，雙日喂食甘藍不限量，結合高脂飼料喂養(yǎng)，同時每日游泳至耐力極限，連續(xù)造模30d。血脂作為痰濁的客觀指標，血清淀粉酶和D-木糖排泄率則是臨床脾虛診斷的指標之一。結果與空白組相比，脾虛痰濁證組大鼠HDL-C水平顯著降低，TC和LDL-C水平顯著升高，血清淀粉酶和D-木糖排泄率均明顯降低。目前為止，這是較為常用的脾虛痰濁造模方法。張會永等[24]對雄性去勢普通級小型豬，施以每日沖刺跑步訓練聯(lián)合高脂飼料單籠飼養(yǎng)干預。4周后開始小豬開始有脾虛痰濁證的表現(xiàn)；第8周時，等待進食行為淡漠、皮毛不澤、口色淡白、糞便稀溏等脾虛痰濁證表現(xiàn)明顯，模型持續(xù)時間至少6周。研究認為小型豬、猴等大型動物營養(yǎng)代謝及生理生化指標更接近于人類，所以更多將小型豬作為脾虛痰濁造模的對象來進行實驗研究[25-26]。中醫(yī)認為肥甘厚膩之物，性滋膩，難消化，影響脾胃的升清降濁功能，易聚濕生痰。膏脂過度聚集血脈，而成“濁”，通過飼喂高脂飼料一方面能夠“損傷脾胃”，另一方面則保證了膏脂的過度聚集，同時結合濕邪困遏與耗氣破氣的方法，多種施加因素聯(lián)合，進一步保證動物模型的建立與穩(wěn)定。

3病證結合動物模型

病證結合的實質是西醫(yī)的“病”和中醫(yī)的“證”相結合，在中醫(yī)藥理論指導下，分別或同時將證候造模因素與疾病造模因素相疊加，令動物模型同時具有疾病與證候特征。

3.1“病”與“證”

同時造模法李靜等[27]通過高脂飼料配合饑飽失常加運動控制的方法建立了大鼠脾虛痰濁型高脂血癥模型。同時指出多因素造模法的脾虛痰濕高脂血癥模型和單純喂飼高脂飲食建立的高脂血癥模型均可使實驗動物產(chǎn)生血脂異常、繼發(fā)性組織脂質堆積，血清AMY和D-木糖排泄率也均降低。但是多因素造模法所制備的動物模型消化功能降低更確切，脾虛痰濁程度也更重。楊關林等[28]以巴馬小型豬為實驗動物，結合跑步與高脂喂飼的方法，模擬勞倦太過和過食肥甘致脾虛痰濁的中醫(yī)病因，建立巴馬小型豬高脂血癥脾虛痰濁證病證結合模型。最終在第16周時達到脾虛痰濁證候模型標準，并穩(wěn)定持續(xù)至28周，并且血脂水平較對照組顯著升高。荀麗英等[29]則以灌服高脂乳劑再配合結扎冠狀動脈的方式構建了胸痹痰濁壅塞證動物模型。陳燕清等[30]采用高脂飼料與結扎頸總動脈的方法，復制了痰濁阻竅證老年期癡呆大鼠病證結合模型。

3.2先“證”后“病”

造模法李資慧等[31]采用內外因復合三硝基苯磺酸的方法建立脾虛濕困型潰瘍性結腸炎大鼠病證結合模型。首先大鼠單日禁食、冰水灌胃，雙日豬油灌胃，每日強迫水中站立控制睡眠，連續(xù)20d，之后再將三硝基苯磺酸與乙醇復合物注入大鼠腸內。結果大鼠出現(xiàn)黏液膿血便、肛周污穢、嗜睡懶動、飲食減少、脫毛及炎癥反應并伴有潰瘍灶形成，說明模型復制成功。柯斌等[32]采用飲食不節(jié)、勞倦過度、寒涼攻下的多因素造模法制作大鼠脾虛痰濕模型，之后再復合鏈脲佐菌素建立了脾虛痰濕型肥胖糖尿病胰島素抵抗大鼠病證結合模型。王志塔等[33]采用高脂飼料喂養(yǎng)大鼠模擬過食肥甘釀生痰濕，4周后，給予低劑量鏈脲佐菌素誘導2型糖尿病動物模型，觀察內生痰濕對糖尿病大鼠的影響。目前尚無先“病”后“證”造模方法文獻。因為，“病”與“證”同時造模，可以是單純的模型建立，亦或是可以體現(xiàn)疾病與證候之間協(xié)同作用；先對“證”進行造模，主要是因為中醫(yī)證候模型，不僅臨床病因復雜多樣，而且對證候的判斷也有一定的主觀性，成模時間更是難以嚴格把握，而“病”的動物模型有比較確定的成模指標及時間，可控制性好。所以在實驗研究中，需要根據(jù)不同的研究對象、不同疾病以及不同的側重因素來選擇最優(yōu)的造模方法。

4結語

中醫(yī)動物模型的復制要求簡單、客觀、重復性好，并且符合中醫(yī)理論。所以根據(jù)中醫(yī)基礎理論，以脾虛生濕為主的動物模型復制主要分為3點：（1）久居濕地——濕易困脾，致脾氣漸虛，脾虛導致濕邪停滯；（2）體虛勞倦，情志不遂——氣機不暢，影響中焦脾胃氣機，使水液運行代謝不暢；（3）飲食不節(jié)——過食肥甘、寒涼飲冷、饑飽失常、飲酒等所致的脾胃受損，致使脾失健運不能為胃行其津液，引起水濕痰濁蓄積停滯。根據(jù)不同的實驗需求，可以單獨或聯(lián)合多種方式同時進行造模。目前“病”的動物模型制備有較明確的方法、特異性的理化指標，來驗證模型的制備是否成功。而“證”的復制則沒有標準化，首先雖然在方法上都是模擬中醫(yī)臨床病因為基礎，但由于施加因素的力度方式不一，導致成模時間也不盡一致。對于一般情況的評價，如食少納呆、蜷縮、舌象改變等，都是主觀觀察，缺乏客觀性、特異性指標。反證藥物以健脾祛濕為主，也有芳香化濕，但沒有經(jīng)典統(tǒng)一的代表方。此外，造模動物以大小鼠為主，較為單一，目前以小型豬等大型動物建立內濕證動物模型的研究仍處于探索階段。脾虛濕困、脾虛濕盛、脾虛痰濕、脾虛痰濁等中醫(yī)證候名詞術語，反映的是中醫(yī)哲學思維，對此沒有具體的客觀指標來界定，各人對證候的理解程度某種意義上也存在差異。總之，中醫(yī)內濕證動物模型標準化、統(tǒng)一化是以后努力的重點。

作者：周游；張杰 單位：中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院