合同管理概念范文

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第1篇

【關(guān)鍵詞】歷史教學(xué)；問題意識(shí)；培養(yǎng)興趣

新世紀(jì)面對(duì)著新課程改革，作為歷史教學(xué)者應(yīng)該怎樣去做呢？這是每一位一線歷史教師多年來一直思考的問題。目前的教學(xué)工作總是提到，要緊扣課程標(biāo)準(zhǔn)，圍繞教學(xué)大綱，開展教育教學(xué)工作，同時(shí)還要體現(xiàn)新課程的理念，這就無形中給教師教學(xué)工作增加了巨大的壓力。一堂課究竟怎樣上才能最大限度的發(fā)揮教師的輔導(dǎo)性和學(xué)生的主動(dòng)性，體現(xiàn)以學(xué)生為主體的優(yōu)勢，利用45分鐘最大限度地激發(fā)和調(diào)動(dòng)學(xué)生的積極性和潛能，讓其每個(gè)學(xué)生都參與到教學(xué)中去，同時(shí)又能在以后應(yīng)試教育和素質(zhì)教育相結(jié)合的教育中取得良好的成績，又能在教育教學(xué)中培養(yǎng)高尚的情操和愛國主義教育，樹立遠(yuǎn)大理想，為實(shí)現(xiàn)偉大復(fù)興中國夢(mèng)做貢獻(xiàn)。這就需要教師研究中學(xué)歷史教學(xué)問題意識(shí)，培養(yǎng)學(xué)生歷史問題意識(shí)，然后指導(dǎo)、解決。

目前，中學(xué)歷史教學(xué)觀念的滯后性、中學(xué)生缺乏歷史學(xué)習(xí)中的問題意識(shí)，與當(dāng)前社會(huì)、學(xué)校等歷史教學(xué)觀念的滯后性有著密切的聯(lián)系。教師選定每一課每一個(gè)問題、指導(dǎo)學(xué)生去解決而不是讓學(xué)生提問題，然后想辦法去解決問題，這是傳統(tǒng)課題的教學(xué)方法和方式。因此，在當(dāng)前新課改以素質(zhì)教育不斷深化的過程中，歷史教學(xué)的問題意識(shí)要改變、要轉(zhuǎn)變，歷史教學(xué)的本質(zhì)、目的、過程等都應(yīng)當(dāng)有所改進(jìn)和提高。

另外，中學(xué)歷史教學(xué)的手段貧乏和單一，歷史教學(xué)大多是以課本為主，并且以平面化的文字、圖片為主，過分理論和政治化、缺乏時(shí)尚感和生活化，從而也弱化了學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣。這就要每一位中學(xué)歷史教師的努力和研究，創(chuàng)造性地進(jìn)入教學(xué)。

一、培養(yǎng)中學(xué)生“問題意識(shí)”啟發(fā)學(xué)生的積極性

在教學(xué)實(shí)踐中，中學(xué)歷史的課堂教學(xué)方法是多種多樣的，其功能和作用也各不相同。在當(dāng)今新課程課堂教學(xué)的過程中，中學(xué)歷史教師應(yīng)當(dāng)結(jié)合學(xué)生的年齡特征和認(rèn)知能力，選擇和運(yùn)用適當(dāng)?shù)慕虒W(xué)內(nèi)容和素材及歷史故事和要件，更新教學(xué)觀念，采用不同方法和途徑，構(gòu)建問題平臺(tái)，搭建教學(xué)舞臺(tái)，讓學(xué)生參與，注重學(xué)生的能力，培養(yǎng)學(xué)生的質(zhì)疑能力，使其提出問題、研究問題、從而解決問題。

二、培養(yǎng)中學(xué)生對(duì)歷史課程的興趣，激發(fā)創(chuàng)造性學(xué)習(xí)的能力

愛因斯坦曾經(jīng)說過，“興趣是最好的老師”。強(qiáng)烈的好奇、濃厚的興趣，是學(xué)生們產(chǎn)生提出問題的前提。教師應(yīng)動(dòng)用一切教學(xué)手段和方法，努力培養(yǎng)學(xué)生的興趣，激發(fā)他們提出問題、探究問題并解決問題。例如：教師可以通過向?qū)W生展示歷史歌曲、播放歷史影像材料、展示歷史圖片、利用家鄉(xiāng)歷史素材（鄉(xiāng)土教材），讓學(xué)生出演歷史短劇等形式，讓學(xué)生自己去琢磨歷史、觸摸歷史、理解歷史、感知?dú)v史、走進(jìn)歷史、學(xué)習(xí)歷史，對(duì)歷史產(chǎn)生強(qiáng)烈的好奇和豐富的想象力，并將好奇心轉(zhuǎn)化為持久的精神動(dòng)力。

三、改變傳統(tǒng)教學(xué)方式和觀念，鼓勵(lì)學(xué)生提出問題，一切創(chuàng)造始于“問題”

在初中歷史教學(xué)的過程中，教師要進(jìn)行繼續(xù)學(xué)習(xí)和教育，增加知識(shí)，更新知識(shí)，研究問題、整合知識(shí)，絕不能在知識(shí)層面上止步不前，二是應(yīng)當(dāng)大膽地改變傳統(tǒng)的歷史教學(xué)理念和方式，鼓勵(lì)學(xué)生們提出問題、樹立問題意識(shí)的理念，并讓課堂教學(xué)成為提出問題、探究問題、解決問題的思維實(shí)驗(yàn)室。

四、加強(qiáng)歷史教研和教研組內(nèi)文化建設(shè)

教研和教研組的建設(shè)和存在的目的在于教學(xué)研究，教學(xué)質(zhì)量的提升、教學(xué)問題的解決、教學(xué)經(jīng)驗(yàn)交流交換和積累，團(tuán)結(jié)和諧的教學(xué)教研氛圍是舒適的工作環(huán)境和高水平的教育教學(xué)的保證。成員之間相互信任、注重交流、研究和探討、尊重和支持，可以優(yōu)勢互補(bǔ)、群策群力、共同進(jìn)步，完成教學(xué)，以便更多的解決學(xué)生可能發(fā)現(xiàn)提出的問題。

第2篇

關(guān)鍵詞：政府管理創(chuàng)新，生態(tài)系統(tǒng)，意義，概念，特征

 

一、政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的提出

政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)作為學(xué)術(shù)范疇而被嚴(yán)格界定和科學(xué)論述，嚴(yán)格地說是從經(jīng)濟(jì)體制轉(zhuǎn)軌和社會(huì)結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)型背景下人們對(duì)政府管理活動(dòng)進(jìn)行新途徑、新方式、新模式和新機(jī)制的探索開始的。在學(xué)術(shù)界，諸多專家和學(xué)者對(duì)政府管理創(chuàng)新問題有著研究興趣，并撰寫出相應(yīng)的理論成果，對(duì)于指導(dǎo)政府管理創(chuàng)新實(shí)踐具有指導(dǎo)意義和價(jià)值，但多數(shù)研究僅僅局限于政府管理實(shí)踐活動(dòng)層面上，沒有突破政府管理學(xué)的理論境遇和思維邏輯，難以擺脫傳統(tǒng)政府管理創(chuàng)新理論的羈絆與禁錮，認(rèn)為政府管理創(chuàng)新就是管理理念的革新、管理方法的改進(jìn)和管理內(nèi)容的變更和管理手段的變換,將政府管理創(chuàng)新視為外在于管理環(huán)境而獨(dú)立存在的實(shí)踐活動(dòng)。

近年來，一些學(xué)者將政府管理創(chuàng)新研究的主題轉(zhuǎn)向了理論分析的方法論層面。生態(tài)學(xué)強(qiáng)調(diào)生物與環(huán)境之間的協(xié)同共生和持續(xù)演化，其所內(nèi)涵的動(dòng)態(tài)、多樣、平衡和有序的思想使得其逐漸成為分析社會(huì)現(xiàn)象和問題的有效工具。如果將政府管理創(chuàng)新置于生態(tài)學(xué)的理論視野內(nèi)加以審視，可以發(fā)現(xiàn)：政府管理創(chuàng)新是一個(gè)復(fù)雜的有機(jī)整體，其與所依存的外部環(huán)境之間存在著相互作用、相互影響、相互促進(jìn)的協(xié)同關(guān)系和共生關(guān)系；不論在構(gòu)成要素方面，還是在要素之間關(guān)系方面，乃至要素與外部環(huán)境之間關(guān)系方面，政府管理創(chuàng)新都處于一個(gè)構(gòu)成要素多樣、環(huán)境因素復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng)中，可以將這個(gè)系統(tǒng)理解為“政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)”。

作為社會(huì)生態(tài)系統(tǒng)的典型形態(tài)，政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的正常運(yùn)作必須具備三方面的條件：第一，必須由人和人圍繞的政府管理創(chuàng)新要素、條件、活動(dòng)組成。人和政府管理創(chuàng)新要素、條件、活動(dòng)既是政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的最基本構(gòu)成要素，也是政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)得以存在的基礎(chǔ)和實(shí)際載體。第二，基本構(gòu)成要素之間、要素與環(huán)境之間、環(huán)境與環(huán)境之間存在相互作用和相互聯(lián)系的機(jī)制。第三，具有特定的功能，這是整體具有不同于各個(gè)組成要素的新功能，這種新功能是由系統(tǒng)內(nèi)部的有機(jī)聯(lián)系和結(jié)構(gòu)決定的，而單個(gè)構(gòu)成要素則不具備，一旦特定功能被取代，系統(tǒng)就會(huì)面臨升級(jí)轉(zhuǎn)型或者解體消亡。只有同時(shí)具備這三個(gè)條件，政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)才是所謂的生態(tài)性政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)，任何條件的不具備或者不完全具備，都會(huì)影響到政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的生態(tài)活度。

二、政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的意義

首先，有利于培養(yǎng)政府管理創(chuàng)新的生態(tài)認(rèn)知。認(rèn)知是行動(dòng)的先導(dǎo)，認(rèn)知水平的高低直接決定行動(dòng)過程及結(jié)果的績效水平。目前，一些地區(qū)政府在進(jìn)行管理創(chuàng)新時(shí)，既不充分了解自身的管理實(shí)踐情況，也不全面顧及政府管理創(chuàng)新的內(nèi)外環(huán)境，進(jìn)而造成政府管理創(chuàng)新過程的不通暢和創(chuàng)新績效的不明顯，嚴(yán)重影響了政府管理創(chuàng)新活動(dòng)的順利開展。通過營造政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)，梳理政府管理創(chuàng)新要素的內(nèi)在關(guān)系，規(guī)整政府管理創(chuàng)新的各種環(huán)境條件，實(shí)現(xiàn)要素關(guān)系和環(huán)境條件的動(dòng)態(tài)平衡與協(xié)調(diào)統(tǒng)一，有利于培養(yǎng)政府管理創(chuàng)新主體的生態(tài)認(rèn)知，使其在政府管理創(chuàng)新過程中既注重要素、環(huán)境條件的客觀性，也強(qiáng)調(diào)要素關(guān)系和環(huán)境條件利用的差異性和整體性。

其次，有利于提高政府管理創(chuàng)新的生態(tài)價(jià)值。生態(tài)文明的不斷崛起和生態(tài)意識(shí)的漸入人心，使得生態(tài)理念逐漸成為指導(dǎo)人們社會(huì)實(shí)踐活動(dòng)的主要理念，人們?cè)谠u(píng)價(jià)實(shí)踐活動(dòng)價(jià)值時(shí)，不僅考慮實(shí)踐活動(dòng)的社會(huì)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，也越來越考慮到實(shí)踐活動(dòng)的生態(tài)價(jià)值。對(duì)于政府管理創(chuàng)新而言，生態(tài)價(jià)值也是其追求的價(jià)值目標(biāo)之一。每個(gè)政府管理創(chuàng)新活動(dòng)都可以視為一個(gè)生態(tài)系統(tǒng)，構(gòu)成這一生態(tài)系統(tǒng)的基本要素，例如創(chuàng)新主體、創(chuàng)新對(duì)象、創(chuàng)新內(nèi)容、創(chuàng)新手段、創(chuàng)新機(jī)制等，由于它們?cè)谏鷳B(tài)系統(tǒng)中的角色和地位有所差異，因而這些構(gòu)成要素的生態(tài)位也各不相同。論文參考，意義。每個(gè)要素生態(tài)位的錯(cuò)位都會(huì)直接影響到系統(tǒng)內(nèi)部要素關(guān)系的穩(wěn)定，進(jìn)而影響到政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的有序發(fā)展。這也正是目前部分政府管理創(chuàng)新績效不明顯的原因所在。論文參考，意義。通過營造生態(tài)系統(tǒng)，來實(shí)現(xiàn)政府管理創(chuàng)新要素功能和要素關(guān)系的最優(yōu)化，進(jìn)而提高政府管理創(chuàng)新的生態(tài)價(jià)值。

最后，有利于增強(qiáng)政府管理創(chuàng)新的競爭優(yōu)勢。對(duì)于政府管理創(chuàng)新主體而言，對(duì)自身情況和內(nèi)外環(huán)境條件的準(zhǔn)確認(rèn)知是其合理利用內(nèi)外環(huán)境因子，充分發(fā)揮管理創(chuàng)新競爭優(yōu)勢，實(shí)現(xiàn)持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展的重要基礎(chǔ)。同時(shí)，也要有效調(diào)節(jié)系統(tǒng)內(nèi)部各要素之間的生態(tài)關(guān)系，使它們能夠最大限度地發(fā)揮各自的功能作用。要素和要素之間關(guān)系的重疊競爭，要素和環(huán)境之間關(guān)系的無序紊亂，都會(huì)造成政府管理創(chuàng)新要素之間的功能妨害與效能內(nèi)耗，進(jìn)而影響到政府管理創(chuàng)新競爭優(yōu)勢的提高。為此，在內(nèi)部層面就需要保持政府管理創(chuàng)新要素之間關(guān)系的有序穩(wěn)定，在外部層面就需要保持政府管理創(chuàng)新要素與外部環(huán)境之間正常的物質(zhì)循環(huán)、能量流動(dòng)和信息傳遞。內(nèi)外層面的有機(jī)結(jié)合形成平衡有序的生態(tài)系統(tǒng)，使得政府管理創(chuàng)新過程得以持續(xù)開展，競爭優(yōu)勢得以有效提高。

三、政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的特征

在持續(xù)不斷的運(yùn)作過程中，政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)逐漸形成了協(xié)同共生的內(nèi)外環(huán)境關(guān)系，體現(xiàn)出整體性、層次性、復(fù)雜性、動(dòng)態(tài)性和自校性等基本特征。

1.整體性。與自然生態(tài)系統(tǒng)相類似，政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)也具有一定的空間形態(tài)。它是政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)在不斷適應(yīng)內(nèi)外環(huán)境變化過程中形成的，是政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)與內(nèi)外部環(huán)境相互適應(yīng)、相互作用的結(jié)果體現(xiàn)。空間形態(tài)既可以表現(xiàn)政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的空間結(jié)構(gòu)，也可以反映政府管理管理生態(tài)系統(tǒng)的未來發(fā)展取向；既可以為政府管理創(chuàng)新目標(biāo)的確定、創(chuàng)新方向的把握和創(chuàng)新戰(zhàn)略的制定提供客觀依據(jù)，也可以為相關(guān)

主體了解政府管理創(chuàng)新的本質(zhì)和規(guī)律提供重要參考。論文參考，意義。政府管理管理生態(tài)系統(tǒng)的空間形態(tài)主要由社會(huì)空間、經(jīng)濟(jì)空間和自然空間組成，社會(huì)空間是政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)存在和發(fā)展的重要條件，主要包括政治空間、教育空間、文化空間、科技空間和制度空間等；經(jīng)濟(jì)空間是政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)存在和發(fā)展的基礎(chǔ)條件，也是政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)價(jià)值目標(biāo)的主要指向；自然空間是政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)存在和發(fā)展的根本條件，也是政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)需要深入研究和分析的空間范圍。自然空間對(duì)政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的影響具有直接性和客觀性。三個(gè)空間之間相互影響，相互作用，形成有機(jī)統(tǒng)一的空間形態(tài)，共同制約政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的生存發(fā)展。論文參考，意義。

2.層次性。結(jié)構(gòu)是要素之間關(guān)系的結(jié)合形式和聯(lián)系狀態(tài)。系統(tǒng)結(jié)構(gòu)是系統(tǒng)內(nèi)部構(gòu)成要素之間的關(guān)系狀態(tài)以及各要素之間的比例特點(diǎn)。政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)就是組成政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的各要素之間的聯(lián)系形式以及各要素與外部環(huán)境之間的關(guān)系形式。論文參考，意義。由于政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)既是社會(huì)生態(tài)系統(tǒng)的子系統(tǒng)，也是一個(gè)具有相對(duì)獨(dú)立功能和發(fā)展演化規(guī)律的有機(jī)系統(tǒng)，因此，政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)既表現(xiàn)社會(huì)生態(tài)系統(tǒng)的部分性質(zhì)，也表現(xiàn)有別于其他生態(tài)系統(tǒng)的特征。從規(guī)模大小上，政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)可分為宏觀結(jié)構(gòu)、中觀結(jié)構(gòu)和微觀結(jié)構(gòu)。宏觀結(jié)構(gòu)主要以社會(huì)環(huán)境結(jié)構(gòu)為背景，中觀結(jié)構(gòu)主要以區(qū)域社會(huì)環(huán)境結(jié)構(gòu)為背景，微觀結(jié)構(gòu)主要以某個(gè)政府的具體管理環(huán)境為背景。從時(shí)空維度上，政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)可分為縱向結(jié)構(gòu)和橫向結(jié)構(gòu)，縱向結(jié)構(gòu)主要是各級(jí)政府行政級(jí)別的大小不同形成的結(jié)構(gòu)，橫向結(jié)構(gòu)主要是同一級(jí)別政府部門形成的結(jié)構(gòu)。宏觀中觀微觀結(jié)構(gòu)相互滲透、縱向橫向結(jié)構(gòu)彼此交融，共同形成動(dòng)靜結(jié)合、縱橫交錯(cuò)的政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。

3.復(fù)雜性。政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)是由生態(tài)主體和生態(tài)環(huán)境組成的有機(jī)系統(tǒng)。政府官員、政府工作人員和政府管理創(chuàng)新研究人員等構(gòu)成政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的生態(tài)主體；對(duì)生態(tài)主體產(chǎn)生作用和影響的各種生態(tài)因子的結(jié)合構(gòu)成政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的生態(tài)環(huán)境，主要包括社會(huì)生態(tài)環(huán)境、經(jīng)濟(jì)生態(tài)環(huán)境、自然生態(tài)環(huán)境等，各層面環(huán)境都不同程度地對(duì)政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)運(yùn)作產(chǎn)生影響。不同的生態(tài)主體擁有不同的生態(tài)環(huán)境，同一生態(tài)主體在不同的發(fā)展時(shí)期也需要不同的生態(tài)環(huán)境。通過生態(tài)主體之間及其與生態(tài)環(huán)境之間的相互作用，政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)形成了適應(yīng)環(huán)境的能力、影響環(huán)境的能力，并不斷實(shí)現(xiàn)從低級(jí)到高級(jí)、從簡單到復(fù)雜、從無序到有序的發(fā)展演化。隨著經(jīng)濟(jì)體制轉(zhuǎn)軌和社會(huì)結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)型，經(jīng)濟(jì)發(fā)展的快速化、社會(huì)競爭的激烈化、人際關(guān)系的復(fù)雜化和利益主體的多元化日漸明顯，分配差距的拉大、腐敗現(xiàn)象的蔓延、階層分化的多元等社會(huì)問題也開始出現(xiàn)[1]，使得政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的生態(tài)環(huán)境更加復(fù)雜，給政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的運(yùn)作發(fā)展帶來了一定挑戰(zhàn)。

4.動(dòng)態(tài)性。在生態(tài)學(xué)的理論視域中，生態(tài)因子是指對(duì)生物的生長發(fā)育具有直接或間接影響的外界環(huán)境要素。論文參考，意義。生態(tài)因子與生物之間的相互作用相當(dāng)復(fù)雜，各種生態(tài)因子的有機(jī)結(jié)合形成生態(tài)環(huán)境，每個(gè)生態(tài)因子都具有不可替代性或可調(diào)劑性。同樣，組成政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的生態(tài)環(huán)境的因子都是生態(tài)因子，各種生態(tài)因子對(duì)政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的發(fā)展起著推動(dòng)或者制約作用。按照表現(xiàn)形式，政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的生態(tài)因子可分為社會(huì)生態(tài)因子、經(jīng)濟(jì)生態(tài)因子和自然生態(tài)因子，社會(huì)生態(tài)因子包括文化因子、教育因子、社會(huì)制度與政策因子、國際政治因子和科學(xué)技術(shù)因子；經(jīng)濟(jì)生態(tài)因子包括消費(fèi)市場因子、物資市場因子、資金市場因子、勞動(dòng)力市場因子、產(chǎn)業(yè)與產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)因子、交通因子、通訊因子、國際經(jīng)濟(jì)因子；自然生態(tài)因子包括地域地緣因子和自然資源因子。[2]各種生態(tài)因子相互促進(jìn)、相互聯(lián)系、相互制約，任何生態(tài)因子的變化，必然會(huì)引起其他生態(tài)因子的變化，進(jìn)而影響政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的發(fā)展。

5.自校性。與自然生態(tài)系統(tǒng)不同，政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的自校平衡性更具有主動(dòng)性，這是由于政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的主體——人具有更強(qiáng)的意識(shí)性和能動(dòng)性。政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)并不是完全受制于外部環(huán)境，它會(huì)根據(jù)自身的實(shí)際情況和環(huán)境發(fā)展變化的具體要求，來不斷適應(yīng)環(huán)境變化。從過程機(jī)制上看，自校平衡主要是由政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)與外部環(huán)境之間的物質(zhì)循環(huán)、能量流動(dòng)和信息傳遞的不平衡所致。物能流轉(zhuǎn)的不平衡往往會(huì)帶來政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)內(nèi)部結(jié)構(gòu)、功能的不穩(wěn)定，影響政府管理創(chuàng)新生態(tài)系統(tǒng)的正常運(yùn)轉(zhuǎn)。為了保持系統(tǒng)內(nèi)外環(huán)境關(guān)系的平衡有序，政府管理創(chuàng)新主體就需要采取相關(guān)措施加以解決。這些措施大致可以分為兩個(gè)方面：一是政府管理創(chuàng)新主體通過優(yōu)化關(guān)系結(jié)構(gòu)、調(diào)整功能機(jī)理和整合運(yùn)作機(jī)制來保持與外部環(huán)境之間關(guān)系的平衡有序；二是通過適當(dāng)改變環(huán)境因子、規(guī)整環(huán)境條件和調(diào)試環(huán)境空間來實(shí)現(xiàn)與外部環(huán)境之間關(guān)系的協(xié)調(diào)統(tǒng)一。

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第3篇

【關(guān)鍵詞】 杯狀細(xì)胞

【Abstract】 AIM: To investigate the effects of human calciumactivated chloride channel 1 (hCLCA1) on synthesis of mucin in airway goblet cells. METHODS: Recombined eukaryotic expression plasmid pIRES2EFGP/hCLCA1， which contained fluorescence tag and G418 screening flag was constructed. The plasmid was stably transfected into NCIH292 cell line， which was regarded as goblet cell model in vitro. Transfected NCIH292/hCLCA1 cells were identified by fluorescence microscopy and hCLCA1 mRNA was detected by RTPCR. Cells were pided into four groups with or without hCLCA1 inhibitor NFA: ① NCIH292; ② NCIH292/hCLCA1; ③ NCIH292+NFA; ④ NCIH292/hCLCA1+NFA. The proliferation of the cells in all groups was detected using MTT colorimetry. The expression of mucin MUC5AC protein and mRNA was examined with PAS staining and RTPCR assay， respectively. RESULTS: NCIH292/hCLCA1 cells that stably expressed hCLCA1 were obtained. The proliferation capability， mucin protein expression and mRNA level of NCIH292/hCLCA1 cells were all significantly higher than those of untransfected cells. NFA markedly inhibited the above changes of NCIH292/hCLCA1 cells. CONCLUSION: hCLCA1 promotes the proliferation and mucin synthesis in airway goblet cells. This study indicates that the inhibition of hCLCA1 may be a potential treatment for asthma.

【Keywords】 asthma; airway; epithelial cells; goblet cells; chloride channel

【摘要】 目的： 探討人激活Cl通道I型（hCLCA1）在氣道杯狀細(xì)胞合成黏蛋白中的調(diào)控作用. 方法： 以人氣道黏液上皮細(xì)胞系NCIH292作為杯狀細(xì)胞特性研究的體外模型，構(gòu)建攜帶熒光蛋白標(biāo)簽的真核表達(dá)質(zhì)粒pIRES2EFGP/hCLCA1，轉(zhuǎn)染NCIH292細(xì)胞，用G418篩選穩(wěn)定表達(dá)hCLCA1的細(xì)胞NCIH292/hCLCA1. 對(duì)被轉(zhuǎn)染細(xì)胞采用熒光顯微鏡和RTPCR法檢測hCLCA1 mRNA. 根據(jù)NFA（hCLCA1阻斷劑）干預(yù)與否，將細(xì)胞分為4組： ① NCIH292；② NCIH292/hCLCA1；③ NCIH292+NFA；④ NCIH292/hCLCA1+NFA. MTT法檢測各組細(xì)胞的增殖活性；PAS特染法檢測各組細(xì)胞黏液糖蛋白的表達(dá)狀況， RTPCR法檢測黏蛋白MUC5AC mRNA水平. 結(jié)果： 經(jīng)過500g/L的G418篩選，證實(shí)獲得NCIH292/hCLCA1細(xì)胞. 對(duì)各組細(xì)胞檢測結(jié)果表明，NCIH292/hCLCA1細(xì)胞的增殖活性、黏液糖蛋白表達(dá)量及MUC5AC mRNA水平均顯著高于親本細(xì)胞，并且NFA能有效抑制NCIH292/hCLCA1的這些生物活性改變. 結(jié)論： hCLCA1能有效促進(jìn)氣道杯狀細(xì)胞的增殖能力及黏蛋白合成，早期阻斷hCLCA1可能是哮喘防治的有效途徑之一.

【關(guān)鍵詞】 哮喘；氣道；上皮細(xì)胞；杯狀細(xì)胞；氯化物通道

0引言

氣道上皮杯狀細(xì)胞增生及伴隨的黏蛋白高分泌是哮喘的主要病理特點(diǎn)之一，并已成為病情加重的指征［1］. 杯狀細(xì)胞產(chǎn)生的黏蛋白MUC5AC被認(rèn)為是該細(xì)胞增生的標(biāo)志［2］. NCIH292是一種人氣道黏液上皮細(xì)胞系，能產(chǎn)生多種黏蛋白，常被作為杯狀細(xì)胞功能特點(diǎn)研究的體外模型［3］. Hoshino等［4］和Toda等［5］相繼證實(shí)，哮喘患者氣道杯狀細(xì)胞的人鈣激活Cl通道I型（human calciumactivated chloride channel， hCLCA1）高表達(dá). hCLCA1屬于一種新近發(fā)現(xiàn)的跨膜陰離子通道家族，一般認(rèn)為該家族與胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)水和電解質(zhì)的功能相關(guān). 我們擬利用體外培養(yǎng)NCIH292細(xì)胞，探討hCLCA1與黏蛋白合成的關(guān)系.

1材料和方法

1.1材料

人氣道黏液上皮細(xì)胞系NCIH292(西京醫(yī)院呼吸內(nèi)科實(shí)驗(yàn)室保存)；pcDNA3.1(+)/hCLCA1質(zhì)粒(美國Levitt RC教授惠贈(zèng))；CLCA阻斷劑NFA（niflumic acid）(Sigma公司)；大腸桿菌JM109及真核表達(dá)載體pIRES2EGFP（具有雙順反子）（第四軍醫(yī)大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室）；γTaq DNA多聚酶、T4 DNA連接酶及限制性內(nèi)切酶NheⅠ， XholⅠ （TaKaRa公司）；RevertAidTM逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Fermentas公司）.

1.2方法

1.2.1pIRES2EGFP/hCLCA1表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建采用NheⅠ和XholⅠ從質(zhì)粒pcDNA3.1(+)/hCLCA1中切出hCLCA1基因片段，將其亞克隆入相同酶切的載體pIRES2EGFP，重組質(zhì)粒命名為pIRES2EGFP/hCLCA1. 轉(zhuǎn)染大腸桿菌JM109感受態(tài)細(xì)胞，鋪板（含卡那霉素），挑克隆，酶切電泳鑒定. 測序鑒定由上海鼎安科技公司完成.

1.2.2細(xì)胞轉(zhuǎn)染及篩選① 新霉素（G418）濃度的確定以細(xì)胞密度4×105 /孔將NCIH292細(xì)胞接種于24孔板中，采用含100 mL/L滅活小牛血清的DMEM進(jìn)行培養(yǎng)，并分別加入梯度濃度G418（200， 300， 400， 500， 600， 700， 800 g/L）. 培養(yǎng)10~14 d，選擇能全部殺死細(xì)胞所用G418的最低濃度. ② 轉(zhuǎn)染與篩選參照Lipofect AMINE 2000TM試劑說明書，在Lipofectin介導(dǎo)下將pIRES2EFGP/hCLCA1轉(zhuǎn)染NCIH292細(xì)胞. 72 h后，改用含G418培養(yǎng)液篩選3~4 wk. 獲得的細(xì)胞命名為NCIH292/hCLCA1.

1.2.3轉(zhuǎn)染細(xì)胞鑒定① 熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞熒光蛋白表達(dá)情況. ②分別收集轉(zhuǎn)染細(xì)胞NCIH292/hCLCA1和親本細(xì)胞NCIH292，經(jīng)TRI REAGENT抽提細(xì)胞總RNA，按照RevertAidTM逆轉(zhuǎn)錄試劑盒產(chǎn)品說明操作步驟，合成cDNA第1鏈，紫外吸收法定量后，用PCR法擴(kuò)增目的片段. 參照文獻(xiàn)［3］合成hCLCA1及內(nèi)參照GAPDH的上下游引物. hCLCA1 5′端引物： TGA TGC TAC TAA GGA TGA C，3′端引物： TTC CTC AGA GTT GGC TTC CT. GAPDH 5′端引物： ACC ACA GTC CAT GCC ATC AC，3′端引物： TCC ACC ACC ACC CTG TTG CTG TA. hCLCA1循環(huán)參數(shù)： 94℃變性30 s， 63℃退火1 min，72℃延伸1 min； GAPDH循環(huán)參數(shù)： 94℃變性20 s， 59℃退火20 s， 72℃延伸20 s；均循環(huán)35次. 各PCR擴(kuò)增產(chǎn)物行瓊脂糖凝膠電泳鑒定.

1.2.4細(xì)胞分組根據(jù)NFA干預(yù)與否分成4組： ① NCIH292；② NCIH292+NFA，待細(xì)胞長至對(duì)數(shù)生長期，加入終濃度為100 mg/L的NFA干預(yù)24 h; ③ NCIH292/hCLCA1；④ NCIH292/hCLCA1+NFA，干預(yù)方案同②. 各組實(shí)驗(yàn)重復(fù)5次.

1.2.5MTT法檢測細(xì)胞的增殖活性將各組細(xì)胞以5×104/孔種植于96孔培養(yǎng)板，待NFA干預(yù)24 h后，每孔加入MTT溶液200 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h. 去上清，每孔加入DMSO 200 μL. 輕度振蕩混勻后，用酶聯(lián)免疫吸附測定儀測定A490 nm.

1.2.6PAS特染法檢測細(xì)胞黏液糖蛋白的表達(dá)取各組細(xì)胞爬片，高碘酸氧化液中浸泡10~20 min. 蒸餾水洗2次. Schiff液染色10 min. 流水清洗5 min. 用Harris明礬蘇木精襯染核2~3 min. 5 mL/L鹽酸乙醇分化30 s，自來水沖洗5 min返藍(lán). 系列乙醇脫水，二甲苯透明，封片.

1.2.7RTPCR法檢測黏蛋白MUC5AC mRNA同1.2.3中RTPCR步驟，合成各組細(xì)胞cDNA第1鏈后，進(jìn)行目的片段的擴(kuò)增. 參照文獻(xiàn)［6］合成MUC5AC的上下游引物，MUC5AC 5′端引物： TCC GGC CTC ATC TTC TCC，3′端引物： ACT TGG GCA CTG GTG CTG. 94℃變性30 s，60℃退火50 s， 72℃延伸50 s，循環(huán)35次. GAPDH為內(nèi)參照. 利用ImageTool 3.0圖像分析軟件，測量各組MUC5AC條帶與GAPDH條帶的灰度值.

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理： 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，通過SPSS 10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析. 多組間比較采用析因設(shè)計(jì)資料的方差分析.

2結(jié)果

2.1重組質(zhì)粒pIRES2EGFP/hCLCA1的鑒定將質(zhì)粒pIRES2EGFP/hCLCA1用NheⅠ和XholⅠ雙酶切后電泳，得到5300 bp和2900 bp 2個(gè)片段，分別與載體及目的基因的預(yù)期大小一致. 初步說明重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建正確（Fig 1）. 測序結(jié)果顯示，目的基因片段的序列與GenBank中No.AF039400的登錄序列完全相同.

2.2細(xì)胞轉(zhuǎn)染效果梯度濃度G418的干預(yù)結(jié)果表明，500 g/L為最適篩選濃度，連續(xù)篩選3 wk. 倒置顯微鏡下觀察，所有存活細(xì)胞呈現(xiàn)單層貼壁生長的梭性或多邊形，與親本NCIH292細(xì)胞形態(tài)相似. 熒光顯微鏡下觀察可見，NCIH292/hCLCA1細(xì)胞的整個(gè)胞體顯現(xiàn)出淡綠色熒光，尤以胞核明顯. RTPCR法檢測hCLCA1 mRNA水平，電泳結(jié)果可見NCIH292/hCLCA1細(xì)胞組在預(yù)期523 bp處出現(xiàn)清晰條帶，而親本細(xì)胞組為陰性. 其中GAPDH cDNA大小為411 bp （Fig 2）. 標(biāo)簽蛋白翻譯水平和目的蛋白轉(zhuǎn)錄水平的檢測均表明，重組質(zhì)粒pIRES2EGFP/hCLCA1轉(zhuǎn)染及表達(dá)過程成功.

2.3細(xì)胞增殖活性與NCIH292細(xì)胞組相比，NCIH292/hCLCA1細(xì)胞組的A490 nm值顯著升高（P

2.4細(xì)胞黏液糖蛋白的表達(dá)NCIH292/hCLCA1細(xì)胞的胞質(zhì)普遍出現(xiàn)深紫紅色顆粒；而其他3組的細(xì)胞胞質(zhì)均呈很淡的紫紅色，且著色程度相近（Fig 4）.

2.5黏蛋白MUC5AC mRNA水平由Fig 5電泳結(jié)果可見，各組均在預(yù)期679 bp處出現(xiàn)特異性條帶. NCIH292/hCLCA1細(xì)胞組的灰度值（235±3）明顯高于NCIH292細(xì)胞組（173±3）和NCIH292/hCLCA1細(xì)胞+NFA組（180±5）（均P

3討論

黏液糖蛋白主要由杯狀細(xì)胞產(chǎn)生，是氣道粘液層的主要成份，并能使黏液具備彈性和粘附性的生理特性. 然而，杯狀細(xì)胞異常增生或化生及由此產(chǎn)生的氣道黏液高分泌，是哮喘的重要病理特征. 臨床研究證實(shí)，黏液高分泌病史是肺功能第1秒用力呼氣量（FEV1）下降加速的獨(dú)立危險(xiǎn)因素. 在哮喘病情加重過程中，這種過度分泌而導(dǎo)致的氣道阻塞尤為突出，常成為重癥哮喘的主要死因之一. 由于杯狀細(xì)胞產(chǎn)生黏蛋白的機(jī)制尚未完全弄清，目前臨床沒有針對(duì)性藥物. 近年來，IL9， IL4， IL13等Th2細(xì)胞因子等外界因素以及杯狀細(xì)胞自身表皮生長因子受體（EGFR）、凋亡抑制蛋白Bcl2等對(duì)粘蛋白產(chǎn)生的促進(jìn)作用，先后得到證實(shí)［7］. 尤其引人注目的是杯狀細(xì)胞CLCA與黏蛋白分泌的關(guān)系. 2001年Nakanishi等［3］首先利用正義和反義RNA技術(shù)證明，小鼠氣道杯狀細(xì)胞鈣激活Cl通道Ⅲ型（mCLCA3）高表達(dá)，是致敏哮喘小鼠粘液高分泌的關(guān)鍵環(huán)節(jié). 而正常小鼠mCLCA3表達(dá)量極低. 次年Hoshino等［4］報(bào)道m(xù)CLCA3的異種同源蛋白hCLCA1在哮喘患者杯狀細(xì)胞高表達(dá)，是正常人群的近3倍. Toda等［5］的結(jié)果還表明，杯狀細(xì)胞hCLCA1 mRNA與IL9R兩者的陽性率密切相關(guān)，提示hCLCA1與其他促分泌因素有著內(nèi)在聯(lián)系. 因此，進(jìn)一步通過離體實(shí)驗(yàn)證實(shí)hCLCA1與杯狀細(xì)胞黏蛋白產(chǎn)生的因果關(guān)系，將為通過阻斷CLCA來控制氣道黏液高分泌提供理論依據(jù). 我們首先證實(shí)在NCIH292細(xì)胞未能檢測到hCLCA1 mRNA. 利用基因工程技術(shù)，成功地將帶有hCLCA1基因的真核表達(dá)載體導(dǎo)入NCIH292細(xì)胞. 從標(biāo)簽蛋白的表達(dá)、hCLCA1的轉(zhuǎn)錄兩方面證實(shí)篩選出NCIH292/hCLCA1穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞. 在此基礎(chǔ)上，MTT法結(jié)果顯示NCIH292/hCLCA1細(xì)胞的增殖活性高于親本細(xì)胞.

PAS特染及RTPCR法檢測表明，NCIH292/hCLCA1細(xì)胞中黏蛋白MUC5AC的含量顯著高于親本細(xì)胞. 這與在體研究結(jié)果相一致［3］. 而CLCA通道阻斷劑NFA有效減低了NCIH292/hCLCA1細(xì)胞的高增殖活性、黏蛋白高表達(dá). 正反兩方面均證實(shí)hCLCA1對(duì)粘蛋白合成具有促進(jìn)作用. 這可能與CLCA對(duì)胞內(nèi)高Ca2＋的維持有著正反饋效應(yīng)有關(guān)［8］. 還需深入研究的是CLCA的胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制及與其他促進(jìn)因素的關(guān)系.

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