每周學(xué)習(xí)計劃范文
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第1篇
【摘要】
目的: 探討肝硬化患者外周血IP10、 IP10 mRNA的表達及其與轉(zhuǎn)氨酶水平的關(guān)系。方法: 篩選典型HBV感染后肝硬化患者， 以ELISA法檢測患者血清IP10水平; Realtime PCR檢測IP10 mRNA含量， 以lg cDNA/lg GAPDH代表其mRNA水平。結(jié)果: 肝硬化患者血清IP10及PBMC中IP10 mRNA水平分別為(299.3±77.2) ng/L、 0.7479±0.1495， 與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P
【關(guān)鍵詞】 肝硬化 IP 10 mRNA PCR 外周血 轉(zhuǎn)氨酶
肝硬化是肝臟纖維結(jié)締組織彌漫性增生伴有肝細胞結(jié)節(jié)狀再生， 是肝細胞在多因素作用下反復(fù)損傷的慢性病理過程。IFNγ誘生蛋白10(interferon γinducible protein 10， IP10)是1985年Luster等用IFNγ刺激U937細胞株， 從cDNA基因庫中篩選出， 屬CXC家族ELR亞族， 可由IFNγ、 LPS等誘導(dǎo)產(chǎn)生， 介導(dǎo)Th1型炎癥反應(yīng)， 抑制血管新生及腫瘤生長。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase， ALT)與天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase， AST)及其AST/ALT比值能判斷肝病進展及肝病預(yù)后的較好指標[1]。為了解IP10與血清轉(zhuǎn)氨酶水平關(guān)系及其在肝硬化發(fā)病機制中的作用， 篩選39例慢性乙肝后肝硬化患者， 探討其外周血IP10及其mRNA水平， 現(xiàn)將結(jié)果報道如下。
1 材料和方法
1.1 材料 FicollHypaque分離液購自上海試劑二廠; HBVDNA診斷試劑購自上海中亞基因研究所; ELISA法IP10試劑盒購自法國DLACLONE公司; TRIzol試劑購自美國Invitrogen公司; cDNA合成試劑購自上海申能博采生物科技有限公司; 半自動生化儀ECOMF6124購自德國Eppendorf公司; EXL808全自動酶標儀和EXL50X全自動洗板機購自美國BioTek公司; LightCycler FastStart DNA Master SYBR GreenⅠ購自德國Roche公司; iCycle熒光實時定量PCR儀購自美國BioRad公司。
1.2 檢測對象 39例肝硬化患者為2006-01/2007-05我校教學(xué)醫(yī)院收治的患者。其中男27例， 女12例， 年齡31.2～62.5歲， 平均44.5歲， ALT升高者18例， AST升高者24例， AST/ALT>1.0者27例; 入選患者均為HBV感染者， 臨床診斷符合2005年全國病毒性肝炎會議修訂診斷標準， 病程均超過6個月， 無合并HAV、 HCV、 HDV、 HEV、 HIV感染的實驗室依據(jù)， 無其他自身免疫性疾病， 3個月內(nèi)未系統(tǒng)使用抗病毒和免疫抑制劑治療。另選25例本市中心血站體檢正常獻血員為對照組， 其中男16例， 女9例， 年齡20.3～42.9歲， 平均32.0歲。
1.3 方法
1.3.1 標本采集 分批采取患者晨起空腹靜脈血5 mL， 分別置2支含肝素的無菌Eppendorf管和2支滅菌普通管。肝素抗凝血以FicollHypaque常規(guī)分離外周血單個核細胞(PBMC)， 普通管常規(guī)分離血清備檢。
1.3.2 血清IP10檢測 采用ELISA以試劑盒提供標準品繪制標準曲線， 每批檢測設(shè)空白、 陰性、 陽性對照各2孔， 取100 μL待測血清和100 μL辣根過氧化物酶（HRP）標記的抗趨化因子單克隆抗體(mAb)， 加至包被有趨化因子mAb的酶標反應(yīng)板孔內(nèi)， 37℃孵育1 h， PBS緩沖液洗滌5次， 加100 μL底物33甲基苯并噻唑啉6磺酸鹽， 室溫30 min， 加2 mol/L H2SO4終止反應(yīng)， 在EXL808全自動酶標分析儀上(450±2) nm處讀取A值， 每孔測定2次， 取均值， 依標準曲線確定血清IP10含量。IP10最低檢測水平
1.3.3 IP10 mRNA檢測 采用Realtime PCR法。將分離的PBMC以RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整細胞數(shù)至(1～2)×109個/L懸液; 以TRIzol試劑抽提PBMC總RNA， 并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA， 置-86℃冰箱備檢。以SYBR GreenⅠ熒光標記法檢測PCR產(chǎn)物， 總反應(yīng)體系25 μL， 包括上下游引物各10 pmol， MgCl2 2.5 mmol/L， ExTaq 1.25 U， dNTP 2 mmol/L， 1×PCR buffer (500 mmol/L KCl， 100 mmol/L Tris， 20 μg/L gelatin， pH8.3)， 2×SYBRTM GreenⅠ液， 2 μL標準品或模板cDNA(1∶5稀釋)。趨化因子引物設(shè)計參照Hirata等方法進行[2， 3]， IP10引物序列和擴增片段長度見表1。PCR擴增參數(shù)如下: 95℃預(yù)變性300 s， 然后95℃ 50 s， 55℃ 40 s， 72℃ 90 s共35個循環(huán)， 最后72℃延伸300 s。以甘油醛3磷酸脫氫酶(GAPDH)為內(nèi)對照， 以lg cDNA/lg GAPDH比值代表其mRNA水平。
表1 HBV及IP10引物序列和擴增片段長度（略）
1.3.4 標準品和標準曲線制備 以GAPDH為參照標準， 為確定定量擴增的效率和靈敏度， 將起始濃度為(106 copies/μL)的GAPDH， 按1∶10設(shè)6個梯度濃度， 即106 copies/μL、 105 copies/μL、 104 copies/μL、 103 copies/μL和102 copies/μL、 0。
1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 IP10及其mRNA水平以x±s表示; 采用SPSS11.5軟件進行t檢驗及相關(guān)分析， P
2 結(jié)果
2.1 不同轉(zhuǎn)氨酶水平患者IP10表達 RTPCR顯示肝硬化患者IP10表達(圖1)， ELISA及Realtime PCR顯示患者外周血IP10及其mRNA水平升高(P
圖1 PBMC中IP10表達（略）
1， 3， 5: GAPDH; 2， 4， 6: IP10; 1， 2: 對照組; 3， 4: 患者1（轉(zhuǎn)氨酶正常）; 5， 6: 患者2（轉(zhuǎn)氨酶升高）.
圖2 IP10及其mRNA與轉(zhuǎn)氨酶關(guān)系（略）
aP
2.2 IP10表達與轉(zhuǎn)氨酶水平關(guān)系 ALT升高組患者血清IP10水平與ALT相關(guān)(r=0.6284， P
圖3 血清IP10水平與ALT相關(guān)性（略）
圖4 血清IP10水平與AST相關(guān)性（略）
圖5 血清IP10水平與AST/ALT相關(guān)性（略）
3 討論
IP10為CXC家族ELR-趨化因子， 對表達CXCR3受體的T淋巴細胞、 單核細胞等產(chǎn)生趨化游走。本研究結(jié)果顯示， HBV感染后肝硬化患者外周血IP10及其mRNA水平增高， 與對照組相比， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P
本實驗結(jié)果顯示， 肝硬化患者血清IP10含量與ALT水平呈正相關(guān)， 表明IP10水平在一定程度上反應(yīng)肝硬化的炎癥活動狀況， 對了解肝硬化的進展有重要意義。HBV感染的肝細胞損傷主要來自宿主的免疫應(yīng)答[7]， 機體內(nèi)免疫復(fù)合物增加， 刺激機體產(chǎn)生大量TNFα、 IL6等前炎癥因子， 這些因子本身可誘使肝臟微循環(huán)障礙， 血液通透性增加， 全身高動力循環(huán)， 肝細胞水腫變性， 繼而壞死， ALT大量釋放入血， IP10表達增強。王健等[8， 9]研究發(fā)現(xiàn)在慢性乙肝及丙型肝炎中IP10表達水平升高且和ALT表達水平呈正相關(guān)， 參與肝炎的慢性化進程。同時血清內(nèi)IP10含量與AST水平呈正相關(guān)。一般情況下， AST升高幅度不及ALT， 隨著HBV的感染持續(xù)， 肝硬化程度加重， 機體內(nèi)毒素水平升高， 可直接殺傷正常和HBV感染肝細胞， 引起肝細胞黃疸， 血清膽紅素升高， 形成肝臟炎癥損害， 使IP10活性增加。Nishioji等[10]研究表明慢性乙肝中血清IP10水平較正常對照組明顯升高， 且和血清轉(zhuǎn)氨酶水平成正相關(guān)。AST/ALT是反映肝細胞損傷嚴重程度和評估預(yù)后發(fā)展的重要指標。本研究結(jié)果提示AST/ALT>1.0組血清IP10水平明顯高于AST/ALT≤1.0組。生理情況下AST/ALT比值約1.15， 肝細胞受損初期比值先下降， 隨著細胞受損加重， 比值呈上升趨勢， 肝硬化患者線粒體破壞， AST明顯升高， AST/ALT>1.0甚至>2.0。IP10對Th1型細胞等有較強的趨化作用， 使其聚集到炎癥部位， 在清除病毒的同時產(chǎn)生溶酶體酶、 氧自由基等炎性介質(zhì)加重肝細胞損傷。
綜上所述， 在HBV感染后肝硬化患者外周血IP10及其mRNA表達水平升高， 與肝細胞損傷程度密切相關(guān)， 在清除病毒的同時加重炎癥反應(yīng)， 在肝炎后肝硬化發(fā)病機制中起重要作用。 參考文獻
肝硬化是肝臟纖維結(jié)締組織彌漫性增生伴有肝細胞結(jié)節(jié)狀再生， 是肝細胞在多因素作用下反復(fù)損傷的慢性病理過程。IFNγ誘生蛋白10(interferon γinducible protein 10， IP10)是1985年Luster等用IFNγ刺激U937細胞株， 從cDNA基因庫中篩選出， 屬CXC家族ELR亞族， 可由IFNγ、 LPS等誘導(dǎo)產(chǎn)生， 介導(dǎo)Th1型炎癥反應(yīng)， 抑制血管新生及腫瘤生長。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase， ALT)與天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase， AST)及其AST/ALT比值能判斷肝病進展及肝病預(yù)后的較好指標[1]。為了解IP10與血清轉(zhuǎn)氨酶水平關(guān)系及其在肝硬化發(fā)病機制中的作用， 篩選39例慢性乙肝后肝硬化患者， 探討其外周血IP10及其mRNA水平， 現(xiàn)將結(jié)果報道如下。
1 材料和方法
1.1 材料 FicollHypaque分離液購自上海試劑二廠; HBVDNA診斷試劑購自上海中亞基因研究所; ELISA法IP10試劑盒購自法國DLACLONE公司; TRIzol試劑購自美國Invitrogen公司; cDNA合成試劑購自上海申能博采生物科技有限公司; 半自動生化儀ECOMF6124購自德國Eppendorf公司; EXL808全自動酶標儀和EXL50X全自動洗板機購自美國BioTek公司; LightCycler FastStart DNA Master SYBR GreenⅠ購自德國Roche公司; iCycle熒光實時定量PCR儀購自美國BioRad公司。
1.2 檢測對象 39例肝硬化患者為2006-01/2007-05我校教學(xué)醫(yī)院收治的患者。其中男27例， 女12例， 年齡31.2～62.5歲， 平均44.5歲， ALT升高者18例， AST升高者24例， AST/ALT>1.0者27例; 入選患者均為HBV感染者， 臨床診斷符合2005年全國病毒性肝炎會議修訂診斷標準， 病程均超過6個月， 無合并HAV、 HCV、 HDV、 HEV、 HIV感染的實驗室依據(jù)， 無其他自身免疫性疾病， 3個月內(nèi)未系統(tǒng)使用抗病毒和免疫抑制劑治療。另選25例本市中心血站體檢正常獻血員為對照組， 其中男16例， 女9例， 年齡20.3～42.9歲， 平均32.0歲。
1.3 方法
1.3.1 標本采集 分批采取患者晨起空腹靜脈血5 mL， 分別置2支含肝素的無菌Eppendorf管和2支滅菌普通管。肝素抗凝血以FicollHypaque常規(guī)分離外周血單個核細胞(PBMC)， 普通管常規(guī)分離血清備檢。
1.3.2 血清IP10檢測 采用ELISA以試劑盒提供標準品繪制標準曲線， 每批檢測設(shè)空白、 陰性、 陽性對照各2孔， 取100 μL待測血清和100 μL辣根過氧化物酶（HRP）標記的抗趨化因子單克隆抗體(mAb)， 加至包被有趨化因子mAb的酶標反應(yīng)板孔內(nèi)， 37℃孵育1 h， PBS緩沖液洗滌5次， 加100 μL底物33甲基苯并噻唑啉6磺酸鹽， 室溫30 min， 加2 mol/L H2SO4終止反應(yīng)， 在EXL808全自動酶標分析儀上(450±2) nm處讀取A值， 每孔測定2次， 取均值， 依標準曲線確定血清IP10含量。IP10最低檢測水平
1.3.3 IP10 mRNA檢測 采用Realtime PCR法。將分離的PBMC以RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整細胞數(shù)至(1～2)×109個/L懸液; 以TRIzol試劑抽提PBMC總RNA， 并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA， 置-86℃冰箱備檢。以SYBR GreenⅠ熒光標記法檢測PCR產(chǎn)物， 總反應(yīng)體系25 μL， 包括上下游引物各10 pmol， MgCl2 2.5 mmol/L， ExTaq 1.25 U， dNTP 2 mmol/L， 1×PCR buffer (500 mmol/L KCl， 100 mmol/L Tris， 20 μg/L gelatin， pH8.3)， 2×SYBRTM GreenⅠ液， 2 μL標準品或模板cDNA(1∶5稀釋)。趨化因子引物設(shè)計參照Hirata等方法進行[2， 3]， IP10引物序列和擴增片段長度見表1。PCR擴增參數(shù)如下: 95℃預(yù)變性300 s， 然后95℃ 50 s， 55℃ 40 s， 72℃ 90 s共35個循環(huán)， 最后72℃延伸300 s。以甘油醛3磷酸脫氫酶(GAPDH)為內(nèi)對照， 以lg cDNA/lg GAPDH比值代表其mRNA水平。
表1 HBV及IP10引物序列和擴增片段長度（略）
1.3.4 標準品和標準曲線制備 以GAPDH為參照標準， 為確定定量擴增的效率和靈敏度， 將起始濃度為(106 copies/μL)的GAPDH， 按1∶10設(shè)6個梯度濃度， 即106 copies/μL、 105 copies/μL、 104 copies/μL、 103 copies/μL和102 copies/μL、 0。
1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 IP10及其mRNA水平以x±s表示; 采用SPSS11.5軟件進行t檢驗及相關(guān)分析， P
2 結(jié)果
2.1 不同轉(zhuǎn)氨酶水平患者IP10表達 RTPCR顯示肝硬化患者IP10表達(圖1)， ELISA及Realtime PCR顯示患者外周血IP10及其mRNA水平升高(P
圖1 PBMC中IP10表達（略）
1， 3， 5: GAPDH; 2， 4， 6: IP10; 1， 2: 對照組; 3， 4: 患者1（轉(zhuǎn)氨酶正常）; 5， 6: 患者2（轉(zhuǎn)氨酶升高）.
圖2 IP10及其mRNA與轉(zhuǎn)氨酶關(guān)系（略）
aP
2.2 IP10表達與轉(zhuǎn)氨酶水平關(guān)系 ALT升高組患者血清IP10水平與ALT相關(guān)(r=0.6284， P
圖3 血清IP10水平與ALT相關(guān)性（略）
圖4 血清IP10水平與AST相關(guān)性（略）
圖5 血清IP10水平與AST/ALT相關(guān)性（略）
3 討論
IP10為CXC家族ELR-趨化因子， 對表達CXCR3受體的T淋巴細胞、 單核細胞等產(chǎn)生趨化游走。本研究結(jié)果顯示， HBV感染后肝硬化患者外周血IP10及其mRNA水平增高， 與對照組相比， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P
第2篇
關(guān)鍵詞：城市規(guī)劃；中軸線1 凡爾賽中軸線的分析
凡爾賽宮(Versailles)是路易十四時期法國古典主義城市設(shè)計的巔峰之作，它的總設(shè)計師是皇家造園師勒?諾特爾(Le Notre)。歷經(jīng)26年之久建成的凡爾賽宮占地面積為1500hm2，為當時巴黎市區(qū)面積的1/4，其中僅花園部分面積就有100hm2。凡爾賽宮苑可分為3部分：宮殿、花園、林園。整個宮苑東西向布局，宮殿座西朝東，它的中軸線向東、西兩邊延伸，貫穿并且總領(lǐng)全局。東面庭院東入口處有軍隊廣場，從中放射出3條林蔭大道穿越城市。園林布置在宮殿之后，也就是西面，近有花園、遠有林園。園林中道路呈幾何規(guī)則式，中軸線長達3km，統(tǒng)領(lǐng)全園，在局部再形成些次要的軸線式布局。從宮殿前向城市延伸出3條呈放射狀的大道，其中兩側(cè)的大道通向兩處離宮，中間的大道通向巴黎市區(qū)的香榭麗舍大街。
從宮殿出發(fā)，凡爾賽宮苑中軸線自東向西，有3km之長。“拉托娜泉池”是花園中軸線的起點。中軸線往西，經(jīng)過寬闊的國王大道，便是“阿波羅泉池”。所以，為了完整地表達中軸線的設(shè)計意念，在軸線的西端設(shè)置一條長1650m、寬62m的大運河，象征著傳說中的西海。古典主義者講究布局的嚴謹和井然有序，講究構(gòu)圖的幾何性和統(tǒng)一性，講究主次有序和軸線明確。它的關(guān)鍵在分清主次，分清統(tǒng)率部分和被統(tǒng)率部分，因此，中軸線突出就成了定則。這種構(gòu)圖就是一種絕對君權(quán)時期的圖解：國王集權(quán)利于一身，他是封建等級制的最高層，他統(tǒng)率全局。凡爾賽宮苑中宏偉壯觀的中軸線不僅統(tǒng)率著全園，也是全園的藝術(shù)中心。宮苑中軸線上，最美的雕塑、水池、噴泉、植壇等依次展開。此外，還有幾條次軸和橫軸，理性地襯托著主軸線。整個園林的布局就是個秩序嚴謹、主次有序的大幾何格局。
2 凡爾賽中軸線對于巴黎城市中軸線的影響
最早在城市中運用這種思想的仍是路易十四最寵信的造園大師勒?諾特爾，他提出的將丟勒里(Tuileries Palace)花園的中軸線以林蔭大道形式向西延伸的宏偉規(guī)劃，使巴黎的城市改建從此有了方向性。軸線到達雄獅凱旋門所在的山頂，長3km，這就是后來一直作為巴黎城市中軸線的香榭麗舍大街(Champs Elysee)。經(jīng)過近百年的建設(shè)和完善，這條軸線景觀大道連接了城市中心區(qū)若干重要的紀念性廣場，從這些廣場如協(xié)和廣場、星形廣場等又放射出若干次軸線并不斷向城市各處延伸。從本質(zhì)上看，這也是將法國古典園林的設(shè)計原則應(yīng)用于城市之中，突出表現(xiàn)了古典主義講究全面規(guī)劃，明確主從關(guān)系，追求和諧統(tǒng)一的風(fēng)格。此外，以協(xié)和廣場為樞紐，中軸線上矗立的皇帝的紀念物在城市上空互相呼應(yīng)，控制了巴黎市中心的風(fēng)貌，表征了中央集權(quán)與帝王的神圣偉大。古典主義那具有強烈秩序感的平面構(gòu)圖和宏偉壯觀的中軸空間，正是那些君主國家或新興資產(chǎn)階級國家首都建設(shè)所需要的。古典主義、唯理主義的城市規(guī)劃不但構(gòu)圖簡潔、幾何性強、軸線明確、主次有序，而且還彰顯宏大壯闊的城市氛圍，強調(diào)秩序、理性、統(tǒng)一、服從，以體現(xiàn)政權(quán)的穩(wěn)固和強大，因而具有明顯的政治含義和象征功能。古典主義規(guī)劃重視幾何構(gòu)圖，幾何在規(guī)劃中能起到澄清和指導(dǎo)作用。
3 中西方城市軸線的演變
從演變的角度來看，北京自從明清兩代之后，除了天安門廣場的改建和尚在規(guī)劃建設(shè)之中的北軸線外，在中軸線上并沒有更多的拓展。相反，原有的城市空間特色和軸線體系卻在迅速消失。城市固有的特色和原來的優(yōu)勢正在逐漸喪失，而巴黎的城市軸線卻從無到有，處在不斷豐富與積累的過程中，不但越積越多，且代表了各個不同時期的作品，體現(xiàn)了歷史發(fā)展的延續(xù)性。北京目前的南北向主軸線(大紅門――永定門――前門――天安門廣場――故宮――景山――鐘鼓樓――北中軸新區(qū))與東西向長安街相交于天安門廣場：而巴黎的東西向主軸(盧浮宮――丟勒里花園――協(xié)和廣場――香榭里舍大街――戴高樂廣場――雄師大街――拉?德方斯新區(qū))則與波旁宮――協(xié)和橋――協(xié)和廣場――馬德蘭教堂軸線相交于協(xié)和廣場。同時，2個城市的主軸線上都布置了最重要的建筑群。北京中軸線上的故宮和巴黎主軸線上的盧浮宮均為原來的皇宮或王宮所在地。另外，2座城市的主軸線都在近現(xiàn)代得到了更新發(fā)展。作為名城歷史上形成的城市主要軸線，軸線上自然以歷史文物建筑為主體，但通過軸線的延伸，收尾部分都在新區(qū)，體現(xiàn)了城市旺盛的生命力。
4 結(jié)語
凡爾賽和明代北京城的中軸線，無不對后來的巴黎和北京城的城市軸線的延伸起到至關(guān)重要的作用。城市的秩序的創(chuàng)造，勻稱的城市肌理和明確的城市中心，在今天的城市規(guī)劃和設(shè)計中，仍然有著它的生命力。
參考文獻
第3篇
【關(guān)鍵詞】咳嗽變異性哮喘；基質(zhì)金屬蛋白酶；外周血細胞計數(shù)
【Abstract】 Objective This study is to investigate the level of matrix metalloproteinase-9(MMP-9)in blood of the patients with cough variant asthma(CVA).Methods To select 30 patients with typical asthma,40 patients with CVA and 20 healthy controls.We detected MMP-9 by enzyme linked immunoabsorbent assay(ELSIA)and detected eosinophil count and lymphocyte count in peripheral blood in the three groups.Results The levels of MMP-9 in plasma of CVA group and typical asthma group were higher than that in healthy group(P0．05);The number of eosinophil in blood of CVA group or typical asthma group was higher than that in healthy group(P0．05);The number of lymphocyte in blood of CVA group was higher than that in typical asthma group and healthy group(P0．05);The relationship between the level of MMP-9 and the eosinophil count or lymphocyte count were both positive correlation.Conclusion CVA is a kind of chronic airway inflammation with eosinophil andlymphocyte,and MMP-9 participates the airway inflammation and airway remodeling in CVA.
典型的支氣管哮喘常有喘息、胸悶、咳嗽三大癥狀，而咳嗽變異性哮喘(cough variant asthma,CVA)，又稱咳嗽型哮喘(cough type asthma)，是指以慢性干咳為主要或唯一臨床表現(xiàn)的一種特殊類型哮喘。隨著病情發(fā)展，約30%在幾年內(nèi)可發(fā)展成典型的支氣管哮喘[1]。早期診斷CVA患者并加以正確的治療，可望減少CVA發(fā)展成典型的支氣管哮喘的幾率。基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)是MMPs家族的一員，MMP-9參與典型哮喘的氣道重塑及氣道炎癥國內(nèi)外已有相關(guān)報道，但MMP-9是否也參與CVA這種特殊類型哮喘的發(fā)病，目前國內(nèi)外未見相關(guān)報道。本研究擬通過觀察CVA患者血清中MMP-9的表達情況及其與外周血中淋巴細胞計數(shù)、嗜酸粒細胞計數(shù)相關(guān)情況，來探討MMP-9在CVA中的作用，為CVA的早期診斷提供依據(jù)。
1 對象及方法
1．1 對象 全部病例均為2005年12月至2007年5月在濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院門診就診和住院治療的患者，按就診順序?qū)⒒颊叻譃镃VA組和典型哮喘組。CVA組，男19例，女21例，平均(32．1±15．2)歲，病程(10．2±3．6)個月，病例診斷符合標準[2-3]。典型支氣管哮喘組，男14例，女16例，平均（38．5±13．9）歲，病程(11．7±5．4)年，病例診斷符合2003年全國支氣管哮喘防治指南的診斷標準[4]。以上兩組患者均為急性發(fā)作期，抽血前1個月均未應(yīng)用糖皮質(zhì)激素，無合并心血管疾病、內(nèi)分泌疾病、免疫風(fēng)濕病等其他系統(tǒng)疾病，并排除妊娠婦女。健康對照組，男9例，女11例，平均(34．3±11．2)歲，均無過敏性疾病、外傷、腫瘤及其他部位病史。以上三組研究對象均無吸煙史，性別、年齡無顯著性差異。
1．2 方法
1．2．1 血清MMP-9測定 留取空腹靜脈血3 ml，靜置自凝1~2 h后，再用3 000 rmp，離心15 min，分離血清，放入-70℃冰箱保存。使用美國R&D SYSTEMS生產(chǎn)的試劑盒，采用ELISA法測定，具體操作參照藥盒說明。
1．2．2 外周血嗜酸粒細胞、淋巴細胞計數(shù) 采外周血按常規(guī)計數(shù)。
1．3 統(tǒng)計學(xué)方法 細胞計數(shù)、MMP-9數(shù)據(jù)用（x±s）表示。多組間均數(shù)比較采用方差分析；相關(guān)性采用直線相關(guān)分析。統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS11．0統(tǒng)計軟件分析。取α=0．05為檢驗水準。
2 結(jié)果
2．1 CVA組與典型支氣管哮喘組、健康對照組血清中MMP-9水平比較 從表1可見，CVA組與典型哮喘組其血清中MMP-9水平顯著高于健康對照組(P0．05)。
2．2 CVA組與典型支氣管哮喘組、健康對照組外周血嗜酸粒細胞、淋巴細胞計數(shù)比較 見表2，CVA組Eos和Lym顯著高于健康對照組(P0．05)，而Lym則顯著高于典型哮喘組(P
2．3 CVA組血清中MMP-9水平與外周血嗜酸細胞計數(shù)、淋巴細胞計數(shù)相關(guān)性分析 由圖1、2可見，CVA組MMP-9水平與外周血嗜酸細胞計數(shù)(r=0．581,P
3 討論
支氣管哮喘是由許多細胞和細胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾患，病理生理表現(xiàn)為氣流阻塞和氣道高反應(yīng)性。其病理學(xué)基礎(chǔ)涉及氣道炎癥和氣道結(jié)構(gòu)改變。CVA作為一種特殊類型的支氣管哮喘，許多研究表明，其發(fā)病機制和病理學(xué)改變與典型支氣管哮喘相似。基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是一組具有相同功能、結(jié)構(gòu)高度同源、依賴鋅離子的內(nèi)肽酶的總稱，其主要作用是降解ECM和基底膜。由于MMPs在介導(dǎo)細胞移行和細胞外基質(zhì)(extral cellear memberma,ECM)重構(gòu)方面具有獨特的作用，近幾年來，人們開始關(guān)注基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑在哮喘發(fā)病過程中所發(fā)揮的作用。MMP-9是MMPs家族的一員，其水平在支氣管哮喘患者的支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)、痰、血清、血漿中都增加[5]。它不僅能降解氣道和肺的ECM和基底膜，而且能調(diào)節(jié)其它蛋白酶和細胞因子，在支氣管哮喘的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。
外周血嗜酸粒細胞、淋巴細胞計數(shù)表明：CVA是以嗜酸性粒細胞、淋巴細胞浸潤為主的慢性氣道炎癥，其中淋巴細胞較典型哮喘明顯增高，提示哮喘的不同階段，其氣道炎癥的啟動機制是有差別的，詳細機理有待于進一步探討。
CVA患者血清中MMP-9水平與外周血嗜酸粒細胞、淋巴細胞相關(guān)性說明：在CVA發(fā)病中嗜酸粒細胞、淋巴細胞可能參與或影響了MMP-9的合成與釋放,這與Ohno,Weeks等[6-7]研究結(jié)果一致。
本研究分別測定CVA患者和典型支氣管哮喘患者急性發(fā)作時血清中MMP-9水平，結(jié)果顯示，CVA患者血清中MMP-9水平和典型支氣管哮喘患者一樣都顯著高于健康對照組(P
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