茯磚茶發(fā)花微生物生物學(xué)特性范文

本站小編為你精心準(zhǔn)備了茯磚茶發(fā)花微生物生物學(xué)特性參考范文，愿這些范文能點(diǎn)燃您思維的火花，激發(fā)您的寫作靈感。歡迎深入閱讀并收藏。

《茶葉科學(xué)雜志》2016年第二期

摘要：

在探明湖南省冬夏兩季茯磚茶發(fā)花期間真菌種群的生長(zhǎng)特性及演替規(guī)律的基礎(chǔ)上，試驗(yàn)對(duì)分離鑒定的27株真菌微生物開(kāi)展了不同培養(yǎng)基、碳源、氮源、溫度等生物學(xué)特性研究，探討不同菌株菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢的情況。結(jié)果表明，所有的發(fā)花微生物均能在茶汁培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，在不同碳、氮源的培養(yǎng)基上以單糖、二糖和有機(jī)氮源為碳、氮源的培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)較快且利于產(chǎn)孢，發(fā)花微生物生長(zhǎng)的最適溫度為25~30℃，超過(guò)30℃或低于25℃將會(huì)抑制生長(zhǎng)。但不同發(fā)花微生物個(gè)體之間又存在著一定差別，表明不同季節(jié)茯磚茶發(fā)花微生物的種類和演變規(guī)律與發(fā)花微生物自身的生物學(xué)特性存在著緊密聯(lián)系。

關(guān)鍵詞：

茯磚茶；發(fā)花微生物；生物學(xué)特性

茯磚茶是一種緊壓黑茶，具有顯著的消滯減肥作用[1-3]。近年來(lái)，隨著人們生活水平的提高，膳食結(jié)構(gòu)的變化，茯磚茶的消費(fèi)區(qū)域不斷擴(kuò)大、需求量在快速增長(zhǎng)[4-5,12-13]。茯磚茶以黑毛茶為原料，經(jīng)過(guò)篩切、拼配、汽蒸渥堆、壓制、發(fā)花干燥等一系列工藝制作而成。其中，“發(fā)花”是茯磚茶加工過(guò)程中特有的工序，通過(guò)精確控制烘房?jī)?nèi)的溫、濕度等環(huán)境條件，促使目標(biāo)有益菌——冠突散囊菌的生長(zhǎng)繁殖，以產(chǎn)生大量的金黃色的閉囊殼，俗稱“金花”[4]，茯磚茶中“金花”的質(zhì)量和數(shù)量是評(píng)價(jià)產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵。研究表明，在發(fā)花過(guò)程中，由于溫、濕度適宜，茶坯中的各種微生物相繼迅速繁殖，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間隨著茶坯中物質(zhì)的逐漸分解，代謝產(chǎn)物開(kāi)始積累，環(huán)境條件不斷變化，微生物區(qū)系隨發(fā)酵時(shí)間而改變，原來(lái)有的各微生物的數(shù)量開(kāi)始下降，取而代之的是一群高度特異化的微生物——冠突散囊菌，即通過(guò)各種微生物類群之間的反復(fù)較量，其中最適合在這種環(huán)境中生長(zhǎng)的微生物種類則最終取得優(yōu)勢(shì)[6-7]。之前有學(xué)者對(duì)茯磚茶發(fā)花優(yōu)勢(shì)微生物的生物學(xué)特性進(jìn)行了分析[8-11]，而與之伴隨生長(zhǎng)的其他微生物生物學(xué)特性未有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)湖南省冬夏兩季生產(chǎn)過(guò)程中的茯磚茶進(jìn)行取樣，分離出27種真菌微生物，在實(shí)驗(yàn)室條件下對(duì)其開(kāi)展生物學(xué)特性研究，以期闡明不同季節(jié)茯磚茶發(fā)花微生物的種類和演替的差異，為進(jìn)一步研究提供參考。

1材料與方法

1.1菌株來(lái)源供試菌株為27株真菌微生物，其中20株為湖南省冬季茯磚茶發(fā)花期間分離得到，另外7株為夏季茯磚茶發(fā)花期間分離得到。

1.2試驗(yàn)方法和內(nèi)容

1.2.1供試菌株的培養(yǎng)和形態(tài)觀察取供試的27株真菌，常溫下復(fù)蘇24h后，轉(zhuǎn)接于查氏培養(yǎng)基中，置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7d。

1.2.2培養(yǎng)基的制備浸提黑毛茶，其中茶汁浸提條件為：茶水比：1∶30，溫度100℃，時(shí)間：30min，供試培養(yǎng)基共6種。M1：茶汁1000mL，瓊脂20.0g。M2：茶汁l000mL，蔗糖20.0g，瓊脂20.0g。M3：茶汁1000mL，蔗糖20.0g，瓊脂20.0g，馬鈴薯200.0g。M4：PSA培養(yǎng)基：蔗糖20.0g，瓊脂20.0g，馬鈴薯200.0g，蒸餾水1000mL。M5：查氏瓊脂培養(yǎng)基：硝酸鈉3.0g，磷酸氫二鉀(K2HPO4)1.0g，氯化鉀0.5g，硫酸鎂(MgSO4•7H2O)0.5g，硫酸亞鐵(FeSO4)0.01g，蔗糖30.00g，瓊脂20.0g，蒸餾水1000mL。M6：水瓊脂培養(yǎng)基：瓊脂20.0g，蒸餾水1000mL，分別于121℃滅菌20min備用。

1.2.3供試菌株在不同培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)狀況研究（1）培養(yǎng)基：將27株供試菌株分別接種在M1、M2、M3、M4、M5、M6上，置于28℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)3d，然后測(cè)定菌落直徑并觀察菌落形態(tài)，每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù)。（2）碳源：以查氏培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，其中蔗糖分別替換成葡萄糖（C1）、蔗糖（C2）、麥芽糖（C3）、淀粉（C4），置于28℃培養(yǎng)箱中，金花菌培養(yǎng)7d，其余菌培養(yǎng)4d，每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù)。（3）氮源：以查氏培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，其中硝酸鈉分別替換成KNO3（N1）、(NH4)2SO4（N2）、蛋白胨（N3）、牛肉膏（N4）、酵母膏（N5），置于28℃培養(yǎng)箱中，金花菌培養(yǎng)7d，其余菌培養(yǎng)4d，每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù)。（4）溫度：將27株供試菌株分別接種在準(zhǔn)備好的PSA固體培養(yǎng)基中，分別置于20℃（T1）、25℃（T2）、28℃（T3）、30℃（T4）、35℃（T5）的條件下，培養(yǎng)3d，每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù)。1.3試驗(yàn)數(shù)據(jù)測(cè)量與分析以上每個(gè)試驗(yàn)在每天的同一時(shí)間測(cè)量菌落直徑。上述所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel及SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，用t檢驗(yàn)及方差分析，檢驗(yàn)各處理間的差異顯著性。

2結(jié)果與分析

2.1供試菌株的三點(diǎn)菌落圖冬季共分離鑒定出20株真菌，其中5株曲霉（Aspergillus）（圖1中1~5），1株冠突散囊菌（Eurotiumcristatum）（圖1中的6），7株青霉（Penicillium）（圖1中7~13），2株芽枝霉（Phycomycetes）（圖1中14~15），1株鐮刀菌（Fusarium）（圖1中16），1株木霉（Trichodermaspp.）（圖1中17），2株毛霉（Mucor）（圖1中18、19），1株酵母菌（Yeast）（圖1中20）；夏季共分離鑒定出7株真菌，其中4株金花菌（圖1中21~24），3株曲霉（圖1中25~27）。27株真菌轉(zhuǎn)接在查氏培養(yǎng)基中，25℃培養(yǎng)7d，菌落形態(tài)見(jiàn)圖1。

2.2不同培養(yǎng)基對(duì)發(fā)花微生物生長(zhǎng)的影響發(fā)花微生物在不同的培養(yǎng)基中，其菌絲生長(zhǎng)速度和產(chǎn)孢數(shù)量顯著不同?？傮w來(lái)看，發(fā)花微生物在M3和M4中生長(zhǎng)較好，在M1和M2中次之，在M5中生長(zhǎng)較慢，M6中最差，但不同發(fā)花微生物個(gè)體之間又存在一定的區(qū)別。從圖2及冬季茯磚茶發(fā)花微生物在培養(yǎng)基中的菌落形態(tài)可知：（1）2株黑曲霉（圖2中1~2），在M1、M2、M3、M4均能生長(zhǎng)，且營(yíng)養(yǎng)成分越充足時(shí)黑曲霉菌絲生長(zhǎng)速度越快，產(chǎn)孢量也越多，但在M6中完全未生長(zhǎng)，表明黑曲霉對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分要求較高。其他3株曲霉，在M6中有少量菌絲生長(zhǎng)，表明這3株曲霉對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高，在其他培養(yǎng)基中具有與黑曲霉相似的生長(zhǎng)規(guī)律。相比黑曲霉，冠突散囊菌（圖2中6）生長(zhǎng)速度較慢，且在M6中也是完全未生長(zhǎng)，表明冠突散囊菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分要求較高；從冠突散囊菌在M1、M2與M5中生長(zhǎng)情況對(duì)比發(fā)現(xiàn)，在M2中生長(zhǎng)更好一些，表明茶汁營(yíng)養(yǎng)成分豐富且比例協(xié)調(diào)，更有利于冠突散囊菌的生長(zhǎng)；此外，在先前的研究中發(fā)現(xiàn)，茯磚茶在發(fā)花的第3天，茶磚內(nèi)部有少量金花菌斑形成；而該菌接種在茶汁培養(yǎng)基中，置于28℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)3d，可發(fā)現(xiàn)菌落稍顯淡黃色，表明此菌生長(zhǎng)速度較慢。（2）青霉（圖2中7~13），從茯磚茶中分離到的7株青霉，對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分要求不高，茯磚茶坯可以滿足其生長(zhǎng)需要。（3）芽枝霉（圖2中14~15），在M6中均能生長(zhǎng)，尤其是芽枝霉2（圖2中15），已有少量孢子產(chǎn)生，表明此菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分要求極低，在其他培養(yǎng)基中具有與黑曲霉相似的生長(zhǎng)規(guī)律；試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在冬季茯磚茶發(fā)花中，最先分離到的就是芽枝霉2，推測(cè)與此菌的生物學(xué)特性有一定關(guān)聯(lián)。（4）鐮刀菌（圖2中16），在M1中生長(zhǎng)速度較快，表明茶汁中的營(yíng)養(yǎng)成分已經(jīng)可以滿足其生長(zhǎng)需要，在茯磚茶發(fā)花中占據(jù)生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)。（5）木霉（圖2中17），在M1中僅有少量菌絲生長(zhǎng)，并無(wú)孢子產(chǎn)生，在M2、M3、M4、M5中生長(zhǎng)相對(duì)較好，在M6中生長(zhǎng)較差，表明此菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分要求較高。（6）毛霉（圖2中18~19），在M1和M6中，生長(zhǎng)相對(duì)較差，不具有生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)，可以在茯磚茶坯中生長(zhǎng)。（7）酵母菌（圖2中20），可以在M6中生長(zhǎng)，同時(shí)對(duì)比在M1和M5中的生長(zhǎng)情況，表明茶汁中含有該菌生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。從圖2及夏季茯磚茶發(fā)花微生物在培養(yǎng)基中的菌落形態(tài)可知：（1）4株金花菌，在M6中幾乎都不能生長(zhǎng)，表明它們對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分要求相對(duì)較高；與第2、3株（圖2中22、23）相比，第1、4株金花菌（圖2中21、24）可以在M1中生長(zhǎng)，對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分要求稍低，試驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)在夏季分離的微生物中，第1、4株金花菌數(shù)目相對(duì)較多，表明金花菌種族之間存在一定差異，但4株金花菌均可以在茯磚茶坯中生長(zhǎng)。（2）3株曲霉，局限曲霉（圖2中25），在M5和M6中幾乎不能生長(zhǎng)，表明它對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求較高，不具生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)；煙曲霉（圖2中26），在M1、M3、M4中生長(zhǎng)情況對(duì)比發(fā)現(xiàn)，在M4中生長(zhǎng)最好，但在M3中生長(zhǎng)相對(duì)較差，推測(cè)茶汁中可能含有抑制或不適宜此菌生長(zhǎng)的物質(zhì)，同時(shí)在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)此菌在夏季發(fā)花茶樣中的數(shù)目較少；黑曲霉（圖2中27），與冬季分離到的黑曲霉具有相似的生長(zhǎng)特征。

2.3不同碳、氮源對(duì)發(fā)花微生物生長(zhǎng)的影響冬季茯磚茶發(fā)花微生物在培養(yǎng)基中的菌落形態(tài)（圖3、圖4）：（1）2株黑曲霉（圖3中1~2），在C1中菌落直徑最大，C3中次之，C2中最??；產(chǎn)孢數(shù)目對(duì)比，C1中最多，C2中次之，C3中最少；在C4中均未生長(zhǎng)，表明單糖既利于菌絲生長(zhǎng)又利于產(chǎn)孢，幾乎不能利用多糖，對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分要求較高。在無(wú)機(jī)氮源的培養(yǎng)基中菌落直徑明顯小于有機(jī)氮源的培養(yǎng)基中，表明有機(jī)氮源更有利于黑曲霉的生長(zhǎng)。其他3株曲霉，具有與黑曲霉相似的生長(zhǎng)規(guī)律，但又有一定的差別，如：在C4中菌絲生長(zhǎng)速度較快，且產(chǎn)生了孢子，表明這3株曲霉可以利用多糖。曲霉4（圖4中的菌落4），在無(wú)機(jī)氮源的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)情況相似，在N5中產(chǎn)生的孢子數(shù)多些，而曲霉5（圖4中5）是在N3中孢子數(shù)多些，表明不同微生物對(duì)氮源的選擇不盡相同。冠突散囊菌（圖3中6），具有與黑曲霉類似的生長(zhǎng)規(guī)律，單糖有利于其菌絲生長(zhǎng)，對(duì)多糖的利用率較差。有機(jī)氮源可以更好地促進(jìn)冠突散囊菌的生長(zhǎng)，但同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，冠突散囊菌在N3、N4中菌落直徑大于在N5中，但在N5中卻產(chǎn)生了大量黑色素，表明N3、N4可以促進(jìn)冠突散囊菌菌絲的生長(zhǎng)，N5可以促進(jìn)孢子的成熟并分泌色素。（2）青霉，除了青霉1（圖3中7）不能在C4中生長(zhǎng)外，其他6株青霉均能生長(zhǎng)，青霉3（圖3中9）較為特殊，在C1和C4中生長(zhǎng)情況相似，表明大部分的青霉可以利用多糖。無(wú)機(jī)氮源對(duì)青霉的生長(zhǎng)促進(jìn)不及有機(jī)氮源，且無(wú)機(jī)氮源中以硝態(tài)氮的促進(jìn)作用較強(qiáng)，有機(jī)氮源有一定區(qū)別；青霉1（圖4中7），酵母膏對(duì)其生長(zhǎng)促進(jìn)作用較強(qiáng)；青霉2~4（圖4中8~10），蛋白胨對(duì)其生長(zhǎng)促進(jìn)作用較強(qiáng)；青霉5~7（圖4中11~13），蛋白胨和酵母膏的促進(jìn)作用相似，但牛肉膏的促進(jìn)作用不如蛋白胨和酵母膏。（3）芽枝霉，在C1、C2、C3中均能正常生長(zhǎng)，在C1和C2中生長(zhǎng)幾乎無(wú)差別，在C4中生長(zhǎng)速度較慢，但可以產(chǎn)孢，表明芽枝霉利用多糖的能力較強(qiáng)。芽枝霉1（圖4中14），在N2中菌絲生長(zhǎng)速度快于以N1中，表明銨態(tài)氮源比硝態(tài)氮源更有利于該菌菌絲生長(zhǎng)，在有機(jī)氮源的生長(zhǎng)情況對(duì)比發(fā)現(xiàn)，N5促進(jìn)作用最強(qiáng)，N3次之，N4最差；芽枝霉2（圖4中15），在無(wú)機(jī)氮源培養(yǎng)基中菌絲生長(zhǎng)速度相似，但在N1中產(chǎn)生了孢子，表明硝態(tài)氮源利于此株菌產(chǎn)孢，在有機(jī)氮源培養(yǎng)基中對(duì)比發(fā)現(xiàn)，酵母膏對(duì)其促進(jìn)作用最強(qiáng)。（4）鐮刀菌，在C1和C2中生長(zhǎng)速度較快，差別不大，在C3中生長(zhǎng)速度稍慢，在C4中生長(zhǎng)明顯受到抑制，生長(zhǎng)速度最慢。無(wú)機(jī)氮源中，硝態(tài)氮源明顯比銨態(tài)氮源的促進(jìn)作用較強(qiáng)，菌落大，菌絲生長(zhǎng)速度快；有機(jī)氮源中以酵母膏的促進(jìn)作用最強(qiáng)，牛肉膏次之，蛋白胨最差。（5）木霉，在4種碳源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度為：C1>C2>C4>C3，在C2和C4中生長(zhǎng)情況相似，表明對(duì)多糖的利用能力強(qiáng)。無(wú)機(jī)氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度和產(chǎn)孢促進(jìn)方面明顯不及有機(jī)氮源，無(wú)機(jī)氮源中，硝態(tài)氮源的促進(jìn)作用低于銨態(tài)氮源，有機(jī)氮源中牛肉膏最差，蛋白胨次之，酵母膏最強(qiáng)。（6）毛霉1~2（圖3中18~19），在C1和C2中生長(zhǎng)正常，在C3中生長(zhǎng)開(kāi)始受到抑制，毛霉1在C4中幾乎不能生長(zhǎng)，但毛霉2在C4中形成了一定菌斑，盡管菌落直徑較小，表明毛霉2具有一定的多糖利用能力。2株毛霉對(duì)無(wú)機(jī)氮源的利用情況有一定差別，毛霉1，硝態(tài)氮源的促進(jìn)作用不及銨態(tài)氮源；毛霉2，與毛霉1正好相反。有機(jī)氮源中，2株毛霉相似，牛肉膏最差，蛋白胨次之，酵母膏的促進(jìn)作用最強(qiáng)。（7）酵母菌，在C1、C2、C3中生長(zhǎng)較為相似，在C4中完全不能生長(zhǎng)，表明此菌對(duì)碳源有一定的要求。有機(jī)氮源的促進(jìn)作用強(qiáng)于無(wú)機(jī)氮源，有機(jī)氮源中，蛋白胨最差，牛肉膏次之，酵母膏最強(qiáng)；無(wú)機(jī)氮源中，硝態(tài)氮源不及銨態(tài)氮源。夏季茯磚茶發(fā)花微生物在培養(yǎng)基中的菌落形態(tài)（圖3、圖4）：（1）金花菌，在C1中生長(zhǎng)最好，在C4中除第1、3株金花菌（圖3中21~23）可以勉強(qiáng)生長(zhǎng)外，第2、4株金花菌（圖3中22~24）均不能生長(zhǎng)。4株金花菌，總體看，有機(jī)氮源的促進(jìn)作用強(qiáng)于無(wú)機(jī)氮源；有機(jī)氮源方面，大體相似，蛋白胨和牛肉膏的促進(jìn)作用不及酵母膏。無(wú)機(jī)氮源方面，第1、3株金花菌類似，銨態(tài)氮源的促進(jìn)作用強(qiáng)于硝態(tài)氮源；第2、4株金花菌相似，硝態(tài)氮源的促進(jìn)作用強(qiáng)于銨態(tài)氮源。（2）3株曲霉，局限曲霉（圖3中25），在C1、C2、C3中可以緩慢生長(zhǎng)，在C4中不能生長(zhǎng)；無(wú)機(jī)氮源促進(jìn)作用相似，有機(jī)氮源中酵母膏的促進(jìn)作用相對(duì)較強(qiáng)。煙曲霉（圖3中26），在C1、C2中生長(zhǎng)較快，差別不大，在C3中生長(zhǎng)略慢，在C4中也可以生長(zhǎng)，生長(zhǎng)速度更為慢些；硝態(tài)氮源的促進(jìn)作用不及銨態(tài)氮源，有機(jī)氮源的促進(jìn)作用與局限曲霉相似。黑曲霉（圖4中27），與冬季茯磚茶樣品中分離到的黑曲霉具有相似的生長(zhǎng)規(guī)律。碳、氮源是微生物生存必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，總體來(lái)看，發(fā)花微生物在以葡萄糖和蔗糖為碳源的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)最好，麥芽糖次之，淀粉較差；相比無(wú)機(jī)氮源，有機(jī)氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度影響明顯，但不同發(fā)花微生物之間又有一定區(qū)別。

2.4不同溫度對(duì)發(fā)花微生物生長(zhǎng)的影響溫度對(duì)微生物的生長(zhǎng)影響顯著，大部分發(fā)花真菌微生物在低于20℃或超過(guò)35℃時(shí)，生長(zhǎng)會(huì)受到抑制，但不同發(fā)花微生物其最適生長(zhǎng)溫度具有一定的差異性。冬季茯磚茶發(fā)花微生物在培養(yǎng)基中的菌落形態(tài)（圖5）：（1）2株黑曲霉（圖5中1~2），在試驗(yàn)的溫度區(qū)間內(nèi)，菌落直徑及產(chǎn)孢數(shù)目與溫度成正比。其他3株曲霉，曲霉3（圖5中3）與黑曲霉具有相似的生長(zhǎng)規(guī)律；曲霉4（圖5中4），在T1~T3，菌落直徑與溫度成正比，從T4以后，生長(zhǎng)明顯受到抑制，在T5時(shí)停止生長(zhǎng)；曲霉5（圖5中5），在T1~T4，菌落直徑與溫度成正比，在T5時(shí)，生長(zhǎng)受到了抑制。冠突散囊菌（圖5中6），在T1時(shí)，未見(jiàn)生長(zhǎng)，在T5時(shí)，生長(zhǎng)受到抑制，在T2~T4，菌落直徑與溫度成正比。（2）青霉，在T3之前，菌落直徑與溫度成正比，T3之后，菌落直徑與溫度成反比。（3）芽枝霉，在T1~T2，菌落直徑與溫度成正比，在T3~T5，菌落直徑與溫度成反比，在T5時(shí)停止生長(zhǎng)。（4）鐮刀菌，在T1~T4，菌落直徑與溫度成正比，氣生菌絲也愈發(fā)致密，在T5時(shí)，生長(zhǎng)受到抑制。（5）木霉，在T1~T4，菌落直徑與溫度成正比，在T5時(shí)，生長(zhǎng)受到抑制。（6）毛霉1（圖5中18），在T1~T4，菌落直徑與溫度成正比，在T5時(shí)，生長(zhǎng)受到抑制；毛霉2（圖5中19），在T3之前，菌落直徑與溫度成正比，在T4之后，生長(zhǎng)受到抑制，T5時(shí)，抑制作用明顯。（7）酵母菌，在T4之前，菌落直徑與溫度成正比，T5時(shí)，生長(zhǎng)受到一定抑制，但該菌在T1~T5，均可生長(zhǎng)。夏季茯磚茶發(fā)花微生物在培養(yǎng)基中的菌落形態(tài)（圖5）：（1）4株金花菌，在T1~T4，菌落直徑與溫度成正比，T5時(shí)生長(zhǎng)受到抑制，但4株金花菌最適生長(zhǎng)溫度又不盡相同。在T1時(shí)，4株金花菌都未見(jiàn)生長(zhǎng)；T2時(shí)，第1株（圖5中21）、4株（圖5中24）開(kāi)始生長(zhǎng)，且已產(chǎn)生了閉囊殼，第2株（圖5中22）、3株（圖5中23）僅有少量菌絲產(chǎn)生；T3~T4，菌落直徑與溫度成正比，且閉囊殼數(shù)目逐漸增多，T5時(shí)，第2株金花菌的生長(zhǎng)受到的抑制作用明顯強(qiáng)于其他3株。（2）3株曲霉，其中局限曲霉，在T4以后，生長(zhǎng)開(kāi)始受到抑制，其他2株曲霉，在試驗(yàn)的溫度區(qū)間內(nèi)，菌落直徑與溫度始終成正比。

3討論

茯磚茶的發(fā)花工藝其實(shí)質(zhì)是培育有益菌——冠突散囊菌的生長(zhǎng)繁殖，通過(guò)空氣中的微生物自然接種，經(jīng)過(guò)反復(fù)較量，冠突散囊菌最終占據(jù)優(yōu)勢(shì)，這是一種自然選擇的結(jié)果。由于不同季節(jié)外界條件差異明顯，發(fā)花環(huán)境中微生物區(qū)系有差異，加之微生物自身的生長(zhǎng)特性，因此不同季節(jié)茯磚茶發(fā)花微生物的種群及演替規(guī)律有差異。通過(guò)對(duì)不同季節(jié)茯磚茶發(fā)花期間分離的微生物的生物學(xué)特性研究發(fā)現(xiàn)，不同微生物對(duì)其生長(zhǎng)物質(zhì)，如碳氮源，利用能力有區(qū)別，表明發(fā)花微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分的需求不一。從發(fā)花微生物的演變上來(lái)看，一般最先分離出來(lái)的不是冠突散囊菌，而是其他利用多糖能力較強(qiáng)的微生物，通過(guò)其創(chuàng)造一定條件，有利于冠突散囊菌繁殖發(fā)育，最終占據(jù)優(yōu)勢(shì)，表明在茯磚茶發(fā)花中微生物的演變與它們的生物學(xué)特性有較大的關(guān)聯(lián)。外界溫度對(duì)發(fā)花微生物的生長(zhǎng)也具有重要影響，一般真菌微生物能在20~35℃之間生長(zhǎng)，但不同微生物對(duì)溫度的敏感程度不盡相同。冬季烘房溫度偏低，在24~28℃之間，而夏季烘房溫度偏高，在30~35℃之間。因此，冬夏兩季分離出的微生物從種類和長(zhǎng)勢(shì)上差異較大。生產(chǎn)中，為滿足發(fā)花微生物的生長(zhǎng)與發(fā)育，在茶坯壓制前添加熬制老茶梗汁液或者一定比例的蔗糖，有利于茯磚茶的發(fā)花，有利于提高“金花”的數(shù)量和大小。過(guò)去有研究[14]認(rèn)為，茯磚茶發(fā)花中，除冠突散囊菌外，其他霉菌等是污染微生物，或?yàn)椤半s菌”，應(yīng)在生產(chǎn)中加以控制。上述研究發(fā)現(xiàn)，茯磚茶坯發(fā)花時(shí)最先生長(zhǎng)的微生物并非是冠突散囊菌。如冬季發(fā)花的茯磚茶，最先生長(zhǎng)的是芽枝霉，然后是青霉和冠突散囊菌等這些微生物逐漸生長(zhǎng)，通過(guò)不斷的較量，最終冠突散囊菌成為優(yōu)勢(shì)微生物，在此期間，發(fā)生了復(fù)雜的變化。這些“雜菌”的存在應(yīng)具有一定作用。又如木霉等能夠很好地利用多糖，可以降解茶葉中的多糖，如纖維素，分解為葡萄糖等單糖，有利于冠突散囊菌的生長(zhǎng)發(fā)育。實(shí)驗(yàn)表明，冬季發(fā)花的茯磚茶“雜菌”較多，最終冠突散囊菌的數(shù)目也較多；夏季發(fā)花的茯磚茶“雜菌”較少，最終茯磚茶成品中冠突散囊菌的數(shù)目也較少，這是值得進(jìn)一步研究的問(wèn)題。發(fā)花工藝是茯磚茶品質(zhì)形成的關(guān)鍵步驟，在目前的茯磚茶生產(chǎn)中，主要是通過(guò)人工控制一定的環(huán)境條件，促使優(yōu)勢(shì)微生物生長(zhǎng)繁殖，但受外界環(huán)境影響較大，茯磚茶質(zhì)量不穩(wěn)定。

通過(guò)對(duì)不同季節(jié)茯磚茶發(fā)花期間微生物種類、演替規(guī)律及生物學(xué)特性，并結(jié)合生產(chǎn)過(guò)程中茯磚茶發(fā)花控制條件的研究，一方面從理論上解釋了不同季節(jié)茯磚茶發(fā)花微生物種類的差異性，另外為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)茯磚茶現(xiàn)代化的精準(zhǔn)誘導(dǎo)調(diào)控發(fā)花工藝奠定了基礎(chǔ)。

作者：趙仁亮 譚吉慧 盧秦華 吳丹 朱旗 單位：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)茶學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 國(guó)家植物功能成分利用工程技術(shù)研究中心