雙歧桿菌失調(diào)預(yù)防范文

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1材料與方法

1.1主要試劑全破壁純赤靈芝孢子膠囊0.3g/顆，雙歧桿菌膠囊0.3g/顆，香港盈康科技控股國際有限公司生產(chǎn)。鹽酸林可霉素注射液0.6g（2ml），福建省福清藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.2實驗動物昆明種清潔級小白鼠，體重（20±2）g，由貴州省實驗動物中心提供。

1.3實驗設(shè)備恒溫培養(yǎng)溫箱，厭氧箱，超凈工作臺,營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，MRS培養(yǎng)基。

1.4方法

1.4.1動物分組及給藥

取昆明種清潔級小鼠110只，隨機(jī)分為靈芝預(yù)防高、中、低劑量組；雙歧預(yù)防高、中、低劑量組；聯(lián)合預(yù)防高、中、低劑量組及正常對照組、菌群失調(diào)組。每組10只，雌雄各半。藥物處理及給藥：靈芝預(yù)防組給予靈芝孢子粉，用無菌蒸餾水溶解干粉后灌胃，高、中、低劑量組分別為2.5、1.25、0.625g·kg-1·d-1。雙歧預(yù)防組給予雙歧桿菌活菌制劑，用無菌蒸餾水溶解干粉后灌胃，高、中、低劑量組分別為7.5、3.75、1.875g·kg-1·d-1。聯(lián)合預(yù)防組給予靈芝孢子粉及雙歧桿菌活菌制劑，用無菌蒸餾水溶解干粉后灌胃，高、中、低劑量組分別為5、2.5、1.25g·kg-1·d-1。連續(xù)給藥7d。除正常對照組外，給予其余各組鹽酸林可霉素注射液500mg·kg-1·d-1,連續(xù)灌胃7d。于停藥第15天，分別進(jìn)行檢測。

1.4.2動物處理及標(biāo)本采集

頸椎脫臼處死小鼠，無菌試管提前稱重并編好序號。取直腸成型糞便3份,置無菌試管內(nèi)封口、稱重（總重量減空試管重量即糞便重量）后,每管按10%稀釋度加入適量NS充分混勻,10-1～10-9連續(xù)10倍倍比稀釋,每稀釋度取0.01ml,依次接種于MRS培養(yǎng)基及肉湯培養(yǎng)基表面，MRS培養(yǎng)基置于厭氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)。按細(xì)菌活菌計數(shù)方法選擇10-5、10-6、10-7有氧培養(yǎng)平板,10-6、10-7、10-8厭氧培養(yǎng)平板計數(shù)［4］。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理

菌落記數(shù)結(jié)果取lg對數(shù),以x±s表示。數(shù)據(jù)分析采用SPSS11.1統(tǒng)計軟件包，配對t檢驗。

2結(jié)果

2.1菌群定量分析結(jié)果

正常菌群組與菌群失調(diào)組菌群定量分析結(jié)果見表1。由表1可以看出經(jīng)鹽酸林可霉素灌胃7d后，菌群失調(diào)組需氧及厭氧培養(yǎng)菌落記數(shù)均明顯少于正常對照組（P＜0.01）。觀察發(fā)現(xiàn)菌群失調(diào)小鼠排稀便，多精神不振，毛發(fā)有不同程度黏濕，說明模型小鼠腸道內(nèi)微生物種群平衡遭到明顯破壞,出現(xiàn)菌群失調(diào)癥。表1正常對照組與菌群失調(diào)組菌群數(shù)（略）

2.2靈芝預(yù)防組菌群定量檢測見表2。由表2可以看出各劑量預(yù)防組不同程度的預(yù)防了由林可霉素造成的菌群數(shù)量減少（P＜0.01）。但靈芝對需氧菌的預(yù)防效果隨劑量增大而減小,而對厭氧菌的預(yù)防效果隨劑量增大而增大，具體原因有待進(jìn)一步研究。中、低劑量組需氧菌較正常對照組無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），高劑量組厭氧菌較正常對照組無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），說明服用靈芝孢子能預(yù)防菌群失調(diào)導(dǎo)致的細(xì)菌數(shù)量減少。

2.3雙歧桿菌預(yù)防組菌群定量檢測見表3。由表3可以看出不同劑量的雙歧桿菌制劑不同程度的預(yù)防了由林可霉素造成的菌群數(shù)量減少（P＜0.01）。對需氧菌的預(yù)防效果隨劑量增加而增大，高劑量組需氧菌較正常組無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），說明服用雙歧桿菌制劑能預(yù)防菌群失調(diào)導(dǎo)致的細(xì)菌數(shù)量減少。表2靈芝預(yù)防組菌群定量檢測（略）

2.4聯(lián)合制劑預(yù)防組菌群定量檢測見表4。不同劑量的聯(lián)合制劑不同程度的預(yù)防了由林可霉素造成的菌群數(shù)量減少（P＜0.01），預(yù)防效果隨劑量增大而增大。聯(lián)合高劑量組厭氧菌落數(shù)與正常對照組比較差異無顯著性（P＞0.05）。表3雙歧桿菌預(yù)防組菌群定量檢測（略）表4聯(lián)合預(yù)防組菌群定量檢測（3討論

在正常人和動物腸道內(nèi)各菌群間按一定比例組合，互相制約，互相依存，在質(zhì)和量上形成一定的生態(tài)平衡。若機(jī)體的內(nèi)外環(huán)境發(fā)生某些變化，導(dǎo)致細(xì)菌繁殖顯著超過正常值的40%以上，則引起腸道食物的分解紊亂，進(jìn)而出現(xiàn)腸菌群失調(diào)癥狀，臨床上表現(xiàn)為急性或慢性腹瀉。保護(hù)正常菌群的生態(tài)環(huán)境，提高機(jī)體免疫力能有效的防治菌群失調(diào)［1］。靈芝孢子是靈芝生長成熟期從菌蓋彈射出來極其細(xì)小的孢子，為靈芝的生殖細(xì)胞，具有靈芝的全部遺傳活性物質(zhì)，可以提高小鼠細(xì)胞免疫和體液免疫水平，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬功能以及體內(nèi)抗體的產(chǎn)生［5～7］。本實驗發(fā)現(xiàn)，靈芝孢子能預(yù)防由林可霉素造成的菌群數(shù)量減少（P＜0.01），但靈芝對需氧菌的預(yù)防效果隨劑量增大而減小,而對厭氧菌的預(yù)防效果隨劑量增大而增大。提示，靈芝孢子可能具有一定的預(yù)防菌群失調(diào)作用。

腸道微生態(tài)平衡的維持還依賴于腸道優(yōu)勢菌雙歧桿菌的作用。雙歧桿菌是非致病性的、能抵抗胃酸和腸道酶類消化、能附著于小腸上皮并能調(diào)節(jié)黏膜免疫反應(yīng)的微生物。雙歧桿菌的細(xì)胞壁可以粘附于腸黏膜上皮細(xì)胞阻止致病菌的入侵，同時通過多種方式抑制有害菌的生長［8］。目前認(rèn)為雙歧桿菌通過代謝產(chǎn)生大量的乳酸和乙酸,降低腸道的pH及Eh值,改善局部微環(huán)境,促進(jìn)腸菌群失調(diào)的恢復(fù)［9］。某些雙歧桿菌合成的小分子量親脂分子具有明顯的抗菌活性，可以抑制細(xì)菌進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，甚至殺滅細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌［10］。本實驗中，雙歧桿菌對需氧菌群失調(diào)的預(yù)防作用隨劑量增大而提高，且高劑量預(yù)防組需氧菌群數(shù)較正常對照組無明顯差異（P＞0.05）；對厭氧菌群失調(diào)的預(yù)防作用未觀察到明顯劑量依賴關(guān)系，提示雙歧桿菌可能對腸道需氧菌群失調(diào)的預(yù)防作用強(qiáng)于對厭氧菌群失調(diào)的預(yù)防作用。將兩藥合用發(fā)現(xiàn)，無論對需氧菌群和厭氧菌群的菌落數(shù)都隨劑量增大而增大，聯(lián)合高劑量組厭氧菌落數(shù)與正常組差異無顯著性（P＜0.05）。

綜上所述,本研究證實，赤靈芝孢子和雙歧桿菌是一種較為有效的預(yù)防菌群失調(diào)劑,聯(lián)合使用效果優(yōu)于單獨使用，但無統(tǒng)計學(xué)意義。其在糾正腸道菌群失調(diào)過程中的具體療效及功能成分,需要進(jìn)一步研究。