雙歧桿菌失調預防范文
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1材料與方法
1.1主要試劑全破壁純赤靈芝孢子膠囊0.3g/顆，雙歧桿菌膠囊0.3g/顆，香港盈康科技控股國際有限公司生產。鹽酸林可霉素注射液0.6g（2ml），福建省福清藥業有限公司生產。
1.2實驗動物昆明種清潔級小白鼠，體重（20±2）g，由貴州省實驗動物中心提供。
1.3實驗設備恒溫培養溫箱，厭氧箱，超凈工作臺,營養肉湯培養基，MRS培養基。
1.4方法
1.4.1動物分組及給藥
取昆明種清潔級小鼠110只，隨機分為靈芝預防高、中、低劑量組；雙歧預防高、中、低劑量組；聯合預防高、中、低劑量組及正常對照組、菌群失調組。每組10只，雌雄各半。藥物處理及給藥：靈芝預防組給予靈芝孢子粉，用無菌蒸餾水溶解干粉后灌胃，高、中、低劑量組分別為2.5、1.25、0.625g·kg-1·d-1。雙歧預防組給予雙歧桿菌活菌制劑，用無菌蒸餾水溶解干粉后灌胃，高、中、低劑量組分別為7.5、3.75、1.875g·kg-1·d-1。聯合預防組給予靈芝孢子粉及雙歧桿菌活菌制劑，用無菌蒸餾水溶解干粉后灌胃，高、中、低劑量組分別為5、2.5、1.25g·kg-1·d-1。連續給藥7d。除正常對照組外，給予其余各組鹽酸林可霉素注射液500mg·kg-1·d-1,連續灌胃7d。于停藥第15天，分別進行檢測。
1.4.2動物處理及標本采集
頸椎脫臼處死小鼠，無菌試管提前稱重并編好序號。取直腸成型糞便3份,置無菌試管內封口、稱重（總重量減空試管重量即糞便重量）后,每管按10%稀釋度加入適量NS充分混勻,10-1～10-9連續10倍倍比稀釋,每稀釋度取0.01ml,依次接種于MRS培養基及肉湯培養基表面，MRS培養基置于厭氧培養箱培養。按細菌活菌計數方法選擇10-5、10-6、10-7有氧培養平板,10-6、10-7、10-8厭氧培養平板計數［4］。
1.5統計學處理
菌落記數結果取lg對數,以x±s表示。數據分析采用SPSS11.1統計軟件包，配對t檢驗。
2結果
2.1菌群定量分析結果
正常菌群組與菌群失調組菌群定量分析結果見表1。由表1可以看出經鹽酸林可霉素灌胃7d后，菌群失調組需氧及厭氧培養菌落記數均明顯少于正常對照組（P＜0.01）。觀察發現菌群失調小鼠排稀便，多精神不振，毛發有不同程度黏濕，說明模型小鼠腸道內微生物種群平衡遭到明顯破壞,出現菌群失調癥。表1正常對照組與菌群失調組菌群數（略）
2.2靈芝預防組菌群定量檢測見表2。由表2可以看出各劑量預防組不同程度的預防了由林可霉素造成的菌群數量減少（P＜0.01）。但靈芝對需氧菌的預防效果隨劑量增大而減小,而對厭氧菌的預防效果隨劑量增大而增大，具體原因有待進一步研究。中、低劑量組需氧菌較正常對照組無統計學差異（P＞0.05），高劑量組厭氧菌較正常對照組無統計學差異（P＞0.05），說明服用靈芝孢子能預防菌群失調導致的細菌數量減少。
2.3雙歧桿菌預防組菌群定量檢測見表3。由表3可以看出不同劑量的雙歧桿菌制劑不同程度的預防了由林可霉素造成的菌群數量減少（P＜0.01）。對需氧菌的預防效果隨劑量增加而增大，高劑量組需氧菌較正常組無統計學差異（P＞0.05），說明服用雙歧桿菌制劑能預防菌群失調導致的細菌數量減少。表2靈芝預防組菌群定量檢測（略）
2.4聯合制劑預防組菌群定量檢測見表4。不同劑量的聯合制劑不同程度的預防了由林可霉素造成的菌群數量減少（P＜0.01），預防效果隨劑量增大而增大。聯合高劑量組厭氧菌落數與正常對照組比較差異無顯著性（P＞0.05）。表3雙歧桿菌預防組菌群定量檢測（略）表4聯合預防組菌群定量檢測（3討論
在正常人和動物腸道內各菌群間按一定比例組合，互相制約，互相依存，在質和量上形成一定的生態平衡。若機體的內外環境發生某些變化，導致細菌繁殖顯著超過正常值的40%以上，則引起腸道食物的分解紊亂，進而出現腸菌群失調癥狀，臨床上表現為急性或慢性腹瀉。保護正常菌群的生態環境，提高機體免疫力能有效的防治菌群失調［1］。靈芝孢子是靈芝生長成熟期從菌蓋彈射出來極其細小的孢子，為靈芝的生殖細胞，具有靈芝的全部遺傳活性物質，可以提高小鼠細胞免疫和體液免疫水平，增強巨噬細胞吞噬功能以及體內抗體的產生［5～7］。本實驗發現，靈芝孢子能預防由林可霉素造成的菌群數量減少（P＜0.01），但靈芝對需氧菌的預防效果隨劑量增大而減小,而對厭氧菌的預防效果隨劑量增大而增大。提示，靈芝孢子可能具有一定的預防菌群失調作用。
腸道微生態平衡的維持還依賴于腸道優勢菌雙歧桿菌的作用。雙歧桿菌是非致病性的、能抵抗胃酸和腸道酶類消化、能附著于小腸上皮并能調節黏膜免疫反應的微生物。雙歧桿菌的細胞壁可以粘附于腸黏膜上皮細胞阻止致病菌的入侵，同時通過多種方式抑制有害菌的生長［8］。目前認為雙歧桿菌通過代謝產生大量的乳酸和乙酸,降低腸道的pH及Eh值,改善局部微環境,促進腸菌群失調的恢復［9］。某些雙歧桿菌合成的小分子量親脂分子具有明顯的抗菌活性，可以抑制細菌進入細胞內，甚至殺滅細胞內的細菌［10］。本實驗中，雙歧桿菌對需氧菌群失調的預防作用隨劑量增大而提高，且高劑量預防組需氧菌群數較正常對照組無明顯差異（P＞0.05）；對厭氧菌群失調的預防作用未觀察到明顯劑量依賴關系，提示雙歧桿菌可能對腸道需氧菌群失調的預防作用強于對厭氧菌群失調的預防作用。將兩藥合用發現，無論對需氧菌群和厭氧菌群的菌落數都隨劑量增大而增大，聯合高劑量組厭氧菌落數與正常組差異無顯著性（P＜0.05）。
綜上所述,本研究證實，赤靈芝孢子和雙歧桿菌是一種較為有效的預防菌群失調劑,聯合使用效果優于單獨使用，但無統計學意義。其在糾正腸道菌群失調過程中的具體療效及功能成分,需要進一步研究。