本站小編為你精心準(zhǔn)備了殼聚糖水提液參考范文，愿這些范文能點燃您思維的火花，激發(fā)您的寫作靈感。歡迎深入閱讀并收藏。
【摘要】目的篩選殼聚糖對黃芩水提液的最佳純化工藝，從而優(yōu)化黃芩苷的提取工藝。方法以黃芩苷得重（得重=粗品黃芩苷重量×黃芩苷濃度）為衡量指標(biāo)，運用正交實驗考察不同影響因素對絮凝效果的影響，同時采用HPLC測定其含量對工藝進(jìn)行系統(tǒng)評價。結(jié)果殼聚糖對黃芩水提液絮凝的最佳工藝條件：體系pH5，攪拌時間10min，體系溫度40℃，絮凝劑濃度0.5%。結(jié)論殼聚糖對黃芩水提液具有較強的絮凝作用，該方法簡單可行，可提高黃芩藥材的利用率。
【關(guān)鍵詞】殼聚糖；黃芩苷；水提液；絮凝劑
黃芩ScutcnanaBaicalensisGeorgi為唇形科植物黃芩的干燥根［1］，主要功效為清熱燥濕、瀉火解毒、止血安胎。黃芩中主要成分為黃酮類化合物，其中含量較高的有效成分有黃芩苷(Baicalin)、漢黃芩苷(Wogonoside)、黃芩素(Baicalein)、漢黃芩素(Wogonin)等。目前代謝研究表明，黃芩苷和漢黃芩苷為前藥，黃芩素和漢黃芩素為二者的真正藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。藥理學(xué)研究表明，黃芩具有多種藥理作用，如抗菌、抗病毒、抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)、抗氧化、清除氧自由基、抗癌、抗腫瘤、抗凝、抗血栓形成和保護(hù)肝臟、心腦血管、神經(jīng)元等作用，目前臨床主要用于抗炎和抗菌。在現(xiàn)代中藥生產(chǎn)中，經(jīng)常使用酸沉法從中藥黃芩中提取粗品黃芩苷來代替黃芩。但在黃芩水提液的酸沉過程中，水提液中的一些有機大分子雜質(zhì)如淀粉、果膠、蛋白質(zhì)等會隨有效成分一起沉降下來，這就造成粗品黃芩苷中含有許多無效成分，降低了療效。如果用傳統(tǒng)的純化工藝，黃芩苷的得率又得不到保證,進(jìn)而造成了原藥材的大量浪費。殼聚糖作為長鏈高分子堿性多糖，在稀酸中可形成活性基團-NH3+，對溶液中帶負(fù)電荷的成分如蛋白質(zhì)、樹膠、鞣質(zhì)、單寧、部分多糖等［2］進(jìn)行吸附，從而達(dá)到對黃芩水提液凈化除雜的作用,在保證產(chǎn)量的前提下實現(xiàn)提高黃芩苷含量的目的。
1儀器與試劑
1.1儀器
LC-20AT型HPLC（島津公司）；88-1型定時恒溫磁力攪拌器（上海司樂儀器有限公司）；中速自動平衡微型離心機（北京醫(yī)用離心機廠）；ZK-82型真空干燥箱（上海市實驗儀器總廠）；德國SartoriusBS224S電子天平；METTLERAE240電子分析天平（瑞士）及實驗過程所需的玻璃儀器。
1.2試劑殼聚糖（濟南海得貝生物公司）；甲醇（色譜純）；雙重蒸餾水;其他試劑均為分析純。
2方法
2.1殼聚糖絮凝劑的配制用1%的乙酸為溶劑，分別配制濃度為0.5%,1.0%，1.5%的殼聚糖溶液，充分溶脹后作為絮凝劑，備用。
2.2黃芩水提液的制備篩選合格的黃芩干燥根，蒸透后切片。稱取黃芩飲片100g，分別加10倍，8倍量水煎煮2次，1h/次，紗布過濾，合并兩次濾液，平分4份，待用。
2.3黃芩苷粗品的制備［3］黃芩水提液→加入殼聚糖→靜置過夜→離心→上清液水浴加熱至40℃→鹽酸調(diào)pH1.5→40℃恒溫1h→靜置過夜→傾去上清液→沉淀水洗至pH6→減壓抽濾→60℃真空干燥→即得。
2.4單因素實驗分別以體系溫度、體系pH、攪拌時間、殼聚糖用量以及殼聚糖的濃度為考察因素，在不同水平下進(jìn)行單因素實驗，以期篩選出影響絮凝效果的主要因素和水平。從而為正交實驗設(shè)計提供依據(jù)。
2.5黃芩苷含量測定方法學(xué)考察
2.5.1色譜條件色譜柱：HypersilODSC18（4.6mm×250mm,5μm，大連伊利特）；檢測器：SPD-20A(SHIMADZU)；工作站：CS-Light；流動相：甲醇－0.4%磷酸水溶液(47∶53)；柱溫：35℃；流速：1ml/min；檢測波長：278nm。
2.5.2對照品溶液的制備取黃芩苷1.67mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加少量甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜過濾，備用。
2.5.3供試品的制備稱取黃芩苷樣品適量，精密稱定，置于5ml量瓶內(nèi)，加少量甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜過濾，備用。
2.5.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別取黃芩苷（0.167mg/ml）標(biāo)準(zhǔn)品溶液2，4，6，8，10，12μl，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得到黃芩苷回歸方程：Y=565266.1X+69456.9，R=0.9997，說明黃芩苷在0.334～2.004μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
2.5.5精密度實驗精密吸取同一供試品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖。測得各共有峰的相對峰面積RSD小于3％，相對保留時間RSD小于1％。表明儀器精密度良好。
2.5.6穩(wěn)定性實驗取同一供試品溶液，分別于0，2，8，16，24h測定，記錄色譜圖。結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定，RSD小于1.5%。
2.5.7重復(fù)性實驗取同一樣品5份，按供試品溶液制備方法進(jìn)行制備，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖。測得各共有峰相對峰面積的RSD小于3％，相對保留時間的RSD小于1％。結(jié)果表明實驗重復(fù)性良好。
2.6正交實驗根據(jù)單因素實驗結(jié)果，采用正交試驗法優(yōu)化實驗操作條件，選擇L9（3）4正交實驗表，分別以pH值（A）、攪拌時間（B）、溫度（C）、絮凝劑濃度（D），作為實驗因素各設(shè)置3個水平，對絮凝條件進(jìn)行考察。結(jié)果見表1。表1正交實驗因素水平（略）
3結(jié)果
3.1攪拌時間對絮凝作用的影響黃芩水提液在自身pH和60℃條件下，隨機取3份黃芩水提液加入1.0%的殼聚糖溶液25ml后,繼續(xù)用攪拌器分別攪拌10，30，50min。再按黃芩苷粗品的工藝流程操作。測其得重依次為：0.9670，0.8474，0.6297。由測定結(jié)果可知，在攪拌10min后其得重最大。
3.2體系pH對絮凝作用的影響隨機取3份黃芩水提液，體系在60℃條件下分別調(diào)節(jié)pH至5，6，7。加入1.0%的殼聚糖溶液25ml并攪拌30min，再按黃芩苷粗品的工藝流程操作。測其得重依次為：1.3746，0.6747，0.3130g。由測定結(jié)果可知，當(dāng)體系pH為5即在自身pH條件下其得重最大，但如果體系pH過低會使黃芩苷大量析出，影響粗品黃芩苷重量。
3.3體系溫度對絮凝作用的影響隨機取3份黃芩水提液，在自身pH條件下恒溫水浴中分別加熱至40，50，60℃。加入1.0%的殼聚糖溶液25ml并攪拌30min，再按黃芩苷粗品的工藝流程操作。測其得重依次為：0.5442，0.5699，0.4276g。由測定結(jié)果可知，當(dāng)體系溫度在50℃時其得重最大。
3.4絮凝劑濃度對絮凝作用的影響隨機取3份黃芩水提液，在自身pH和60℃條件下分別加入0.5％，1.0％，1.5％的殼聚糖溶液25ml并攪拌30min，再按黃芩苷粗品的工藝流程操作。測其得重依次為：1.1963，0.9902，0.9678g。由測定結(jié)果可知，用0.5％的殼聚糖溶液作絮凝劑時其得重最大。
3.5絮凝劑用量對絮凝作用的影響隨機取3份黃芩水提液，在自身pH和60℃條件下分別加入1.0%的殼聚糖15，25，35ml并攪拌30min，再按黃芩苷粗品的工藝流程操作。測其得重依次為：1.1771，1.0917，1.0907g。由測定結(jié)果可知，加入15ml1.0%的殼聚糖作絮凝劑時其得重最大。但其得重的變化率低于其他因素得重的變化率，相對于上述4個因素而言，殼聚糖用量對絮凝作用的影響可以忽略，可以不作為主要影響因素考察。
3.6正交實驗結(jié)果與分析見表2～3。表2正交實驗結(jié)果與分析（略）表3實驗結(jié)果方差分析（略）
由表2～3可知，攪拌時間的極差最大，其次是體系pH，故對黃芩水提液絮凝效果影響的大小順序為B>A>D>C,最佳絮凝條件為A1B1C1D1，即體系pH5，攪拌時間10min，體系溫度40℃，絮凝劑濃度0.5%。
3.7最佳方案的驗證實驗以正交表所得出的最佳絮凝條件為工藝條件，取黃芩飲片25g，按黃芩苷粗品的工藝流程操作。重復(fù)兩次。結(jié)果見表4。表4驗證實驗結(jié)果（略）
由表4可知，采用優(yōu)化的最佳工藝對黃芩水提液進(jìn)行除雜后，其黃芩苷得重顯著增高，且工藝條件穩(wěn)定可靠。
4討論與結(jié)論
實驗表明，在保證得率的前提下，殼聚糖對黃芩水提液有較好的絮凝凈化作用，而且絮凝作用具有良好的選擇性。本實驗在綜合考慮各種因素的影響后，最終確定了絮凝的最佳工藝條件：體系pH=5，攪拌時間10min，體系溫度40℃，絮凝劑濃度0.5%。本實驗在克服傳統(tǒng)酸沉法不能兼顧得率與含量的缺點的基礎(chǔ)上，采用絮凝法進(jìn)行除雜，取得良好的預(yù)期效果，得重較高，有效地減少有效成分的損失，并且工藝簡單，提高了原藥料的利用率。
殼聚糖屬于一種高分子聚合物，絮凝是通過長碳鏈上的一些活性官能團，可在同一個分子上吸附多個微粒。因而它在微粒之間產(chǎn)生了聯(lián)系作用，這種作用稱之為架橋作用。由于這種作用，可以將許多微粒連接在一起形成一個絮團［2］。
絮凝是一個復(fù)雜的化學(xué)動力學(xué)過程。攪拌和pH對絮凝效果有顯著的影響，原因可能是：當(dāng)攪拌不充分時，會導(dǎo)致加入的殼聚糖局部濃度過高，使殼聚糖不能及時充分地與微粒相結(jié)合，反而被先形成的絮團所包容而沉淀出來，這種沉淀下來的絮團的動力學(xué)常數(shù)相當(dāng)穩(wěn)定，一般的攪拌方式不能有效地一一對其進(jìn)行完全的破環(huán)。這就大大降低了殼聚糖的利用率。同時如果在較低的pH條件下，更有利于殼聚糖分子中的活性基團-NH3+的形成，使絮凝作用進(jìn)行得更完全。新晨：
【參考文獻(xiàn)】
1］國家藥典委員會．中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：211.
［2］董方言．現(xiàn)代實用中藥新劑型新技術(shù)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001．
［3］冀春茹.中藥化學(xué)實驗技術(shù)與實驗［M］.鄭州：河南科學(xué)技術(shù)出版社，1986：273