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1.苗種放養(yǎng)
(1)縊蟶苗種:3月29日,池塘水溫9℃以上,天氣晴好,池塘水深1.2米,苗種規(guī)格4780粒/千克,按蟶床面積計(jì)算,每平方米放苗440粒,共放蟶苗70箱(每箱25千克)。播種時(shí)工人行走在蟶床邊,將苗均勻撒播在埕面上。
(2)對蝦:4月22日,池塘水溫15.5℃,每畝放中國對蝦“黃海1號”蝦苗5000尾,共放蝦苗80萬尾。蝦苗大小均勻、體質(zhì)健壯、體長1.0厘米以上,放苗時(shí),將裝有蝦苗的塑料袋浮放在養(yǎng)殖池水面,使袋內(nèi)外水溫達(dá)到平衡,然后放苗入池。
(3)海蜇:采用多茬輪捕養(yǎng)殖法。5月7日,池塘水溫穩(wěn)定在18℃以上時(shí)放第一茬苗,共放養(yǎng)10000個(gè);5月27日,放第二茬海蜇苗5000個(gè);6月10日,放第三茬海蜇苗10000個(gè);7月20日,放第四茬海蜇苗10000個(gè)。累計(jì)每畝放苗量219個(gè)。
(4)牙鲆:6月2日,放養(yǎng)規(guī)格3厘米牙鲆苗4萬尾,每畝放苗250尾。
2.養(yǎng)殖管理
(1)水質(zhì)管理:以控制水色、透明度等為重點(diǎn),保持水質(zhì)穩(wěn)定。定期檢測水溫、溶解氧、鹽度、pH值、硝酸態(tài)氮、亞硝酸態(tài)氮、氨態(tài)氮、透明度等指標(biāo)。透明度以50~60厘米為宜,溶解氧5毫克/升以上,pH值7.8~8.6。前期以加水為主,每汛加水20~30厘米,水位控制在1.2~1.4米,中后期逐漸將池水加到2米左右,每汛換水量20%~40%。加水、換水不僅可以改善水質(zhì),還可以帶進(jìn)餌料生物。養(yǎng)殖過程中根據(jù)水色和透明度確定是否肥水,以透明度60厘米為基準(zhǔn),小于60厘米不施肥,大于60厘米施肥。前期,水溫較低,池水透明度超過了80厘米,使用硅藻王和藻速王進(jìn)行肥水,共潑灑硅藻王4次、藻速王20次。每汛換完水后使用溴氯海因消毒池水,2~3天后,使用微生態(tài)制劑改善底質(zhì)和水質(zhì)。各種微生態(tài)制劑交替使用,“枯草芽孢桿菌”每月使用一次,底改劑類每月使用2次。8月份以后,當(dāng)水中溶解氧低于5毫克/升,使用增氧片作應(yīng)急處理。
(2)餌料管理:蟶苗投入10天以后,因池水透明度變大,補(bǔ)充投喂豆?jié){,將黃豆粉碎成漿,每天投喂50千克(干豆),共投喂黃豆1000千克。蝦苗入池10天后,開始投喂用絞肉機(jī)絞碎的沙里鉆(玉筋魚)、鳀魚,日投餌2次,投餌量根據(jù)對蝦胃腸道飽滿度、生長情況和餌料盤剩餌情況等確定,前期投喂量較少,每天每畝投喂0.3千克左右,隨著海蜇苗和牙鲆苗的放養(yǎng),絞碎的魚糜投喂量逐漸增加,最多時(shí)每天每畝投喂4.5千克,共投喂雜魚68000千克。魚糜中大顆粒魚肉可被牙鲆、對蝦利用,小顆粒魚肉可被海蜇利用,微細(xì)魚肉可被縊蟶利用。日常管理中,嚴(yán)防餌料過剩。
二、結(jié)果
1.收獲
6月25日收獲海蜇34000千克,7月5日收獲海蜇9000千克,7月14日收獲海蜇7000千克,7月24日收獲海蜇29500千克,8月2日收獲海蜇29500千克,8月20日收獲海蜇17000千克,9月15日收獲海蜇10960千克,共收獲海蜇136960千克,畝產(chǎn)856千克。9月23日收獲縊蟶49600千克,畝產(chǎn)310千克。共收獲對蝦2800千克,畝產(chǎn)17.5千克。收獲牙鲆大規(guī)格魚種9280尾。
2.效益分析
海蜇平均售價(jià)10元/千克、產(chǎn)值1369600元,縊蟶產(chǎn)值813440元,對蝦售價(jià)70元/千克、產(chǎn)值196000元,牙鲆大規(guī)格魚種越冬未出售。總產(chǎn)值2379040元,畝產(chǎn)值14869元??偝杀緸?12140元,分別是地租480000元、苗種費(fèi)84100元、餌料費(fèi)176800元、藥品費(fèi)61240元、人工費(fèi)60000元、水電費(fèi)45000元、防護(hù)網(wǎng)等其他費(fèi)用5000元。扣除成本后,利潤1466900元,畝利潤9168元。
三、討論
1.多茬輪捕養(yǎng)殖法有利于提高海蜇養(yǎng)殖產(chǎn)量
本試驗(yàn)采取了不對稱多茬輪捕養(yǎng)殖法,海蜇苗種放養(yǎng)只有4次,而拉網(wǎng)收獲高達(dá)7次,這種養(yǎng)殖法的關(guān)鍵是通過控制放苗批次,形成大、中、小多種規(guī)格同塘養(yǎng)殖,與同步放養(yǎng)同步收獲相比,海蜇存塘量明顯增加,有效地提高了池塘生產(chǎn)力。
2.海蜇養(yǎng)殖要嚴(yán)控池水透明度
關(guān)鍵詞海洋生物技術(shù)發(fā)展展望
近10年來,由于海洋在沿海國家可持續(xù)發(fā)展中的戰(zhàn)略地位日益突出,以及人類對海洋環(huán)境特殊性和海洋生物多樣性特征的認(rèn)識不斷深入,海洋生物資源多層面的開發(fā)利用極大地促進(jìn)了海洋生物技術(shù)研究與應(yīng)用的迅速發(fā)展。1989年首屆國際海洋生物技術(shù)大會(以下簡稱MPS大會)在日本召開時(shí)僅有幾十人參加,而1997年第四屆IMBC大會在意大利召開時(shí)參加入數(shù)達(dá)1000多人。現(xiàn)在IMBC會議已成為全球海洋生物技術(shù)發(fā)展的重要標(biāo)志,出現(xiàn)了火紅的局面。《IMBC2000》在澳大利亞剛剛開過,《IMBC2003》的籌備工作在日本已經(jīng)開始,以色列為了舉辦們《IMBC2006》早早作了宣傳,并爭到了舉辦權(quán)。每3年一屆的IMBC不僅吸引了眾多高水平的專家學(xué)者前往展示與交流研究成果,探討新的研究發(fā)展方向,同時(shí)也極大地推動(dòng)了區(qū)域海洋生物技術(shù)研究的發(fā)展進(jìn)程。在各大洲,先后成立了區(qū)域性學(xué)術(shù)交流組織,如亞太海洋生物技術(shù)學(xué)會、歐洲海洋生物技術(shù)學(xué)會和泛美海洋生物技術(shù)協(xié)會等。各國還組建了一批研究中心,其中比較著名的為美國馬里蘭大學(xué)海洋生物技術(shù)中心、加州大學(xué)圣地亞哥分校海洋生物技術(shù)和環(huán)境中心,康州大學(xué)海洋生物技術(shù)中心,挪威貝爾根大學(xué)海洋分子生物學(xué)國際研究中心和日本海洋生物技術(shù)研究所等。這些學(xué)術(shù)組織或研究中心不斷舉辦各種專題研討會或工作組會議研究討論富有區(qū)域特色的海洋生物技術(shù)問題。1998年在歐洲海洋生物技術(shù)學(xué)會、日本海洋生物技術(shù)學(xué)會和泛美海洋生物技術(shù)協(xié)會的支持下,原《海洋生物技術(shù)雜志》與《分子海洋生物學(xué)和生物技術(shù)》合刊為《海洋生物技術(shù)》學(xué)報(bào)(以下簡稱MBT),現(xiàn)在它已成為一份具有權(quán)威性的國際刊物。海洋生物技術(shù)作為一個(gè)新的學(xué)科領(lǐng)域已明確被定義為“海洋生命的分子生物學(xué)如細(xì)胞生物學(xué)及其它的技術(shù)應(yīng)用”。
為了適應(yīng)這種快速發(fā)展的形勢,美國、日本、澳大利亞等發(fā)達(dá)國家先后制定了國家發(fā)展計(jì)劃,把海洋生物技術(shù)研究確定為21世紀(jì)優(yōu)先發(fā)展領(lǐng)域。1996年,中國也不失時(shí)機(jī)地將海洋生物技術(shù)納入國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃),為今后的發(fā)展打下了基礎(chǔ)。不言而喻,迄今海洋生物技術(shù)不僅成為海洋科學(xué)與生物技術(shù)交叉發(fā)展起來的全新研究領(lǐng)域,同時(shí),也是21世紀(jì)世界各國科學(xué)技術(shù)發(fā)展的重要內(nèi)容并將顯示出強(qiáng)勁的發(fā)展勢頭和巨大應(yīng)用潛力。
1.發(fā)展特點(diǎn)
表1和表2列出的資料大體反映了當(dāng)前海洋生物技術(shù)研究發(fā)展的主要特點(diǎn)。
1.1加強(qiáng)基礎(chǔ)生物學(xué)研究是促進(jìn)海洋生物技術(shù)研究發(fā)展的重要基石
海洋生物技術(shù)涉及到海洋生物的分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、生殖生物學(xué)、遺傳學(xué)、生物化學(xué)、微生物學(xué),乃至生物多樣性和海洋生態(tài)學(xué)等廣泛內(nèi)容,為了使其發(fā)展有一個(gè)堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ),研究者非常重視相關(guān)的基礎(chǔ)研究。在《IMBC2000》會議期間,當(dāng)本文作者詢問一位資深的與會者:本次會議的主要進(jìn)步是什么?他毫不猶豫的回答:分子生物學(xué)水平的研究成果增多了。事實(shí)確實(shí)如此。近期的研究成果統(tǒng)計(jì)表明,海洋生物技術(shù)的基礎(chǔ)研究更側(cè)重于分子水平的研究,如基因表達(dá)、分子克隆、基因組學(xué)、分子標(biāo)記、海洋生物分子、物質(zhì)活性及其化合物等。這些具有導(dǎo)向性的基礎(chǔ)研究,對今后的發(fā)展將有重要影。
1.2推動(dòng)傳統(tǒng)產(chǎn)業(yè)是海洋生物技術(shù)應(yīng)用的主要方面
目前,應(yīng)用海洋生物技術(shù)推動(dòng)海洋產(chǎn)業(yè)發(fā)展主要聚焦在水產(chǎn)養(yǎng)殖和海洋天然產(chǎn)物開發(fā)兩個(gè)方面,這也是海洋生物技術(shù)研究發(fā)展勢頭強(qiáng)勁。充滿活力的原因所在。在水產(chǎn)養(yǎng)殖方面,提高重要養(yǎng)殖種類的繁殖、發(fā)育、生長和健康狀況,特別是在培育品種的優(yōu)良性狀、提高抗病能力方面已取得令人鼓舞的進(jìn)步,如轉(zhuǎn)生長激素基因魚的培育、貝類多倍體育苗、魚類和甲殼類性別控制、疾病檢測與防治、DNA疫苗和營養(yǎng)增強(qiáng)等;在海洋天然產(chǎn)物開發(fā)方面,利用生物技術(shù)的最新原理和方法開發(fā)分離海洋生物的活性物質(zhì)、測定分子組成和結(jié)構(gòu)及生物合成方式、檢驗(yàn)生物活性等,已明顯地促進(jìn)了海洋新藥、酶、高分子材料、診斷試劑等新一代生物制品和化學(xué)品的產(chǎn)業(yè)化開發(fā)。
表1近期IMBC大會研討的主要內(nèi)容
表2近期IMBC大會和《MarineBiotechnology》學(xué)報(bào)論文統(tǒng)計(jì)表
1.3保證海洋環(huán)境可持續(xù)利用是海洋生物技術(shù)研究應(yīng)用的另一個(gè)重要方面
利用生物技術(shù)保護(hù)海洋環(huán)境、治理污染,使海洋生態(tài)系統(tǒng)生物生產(chǎn)過程更加有效是一個(gè)相對比較新的應(yīng)用發(fā)展領(lǐng)域,因此,無論是從技術(shù)開發(fā),還是產(chǎn)業(yè)發(fā)展的角度看,它都有巨大的潛力有待挖掘出來。目前已涉及到的研究主要包括生物修復(fù)(如生物降解和富集、固定有毒物質(zhì)技術(shù)等)、防生物附著、生態(tài)毒理、環(huán)境適應(yīng)和共生等。有關(guān)國家把“生物修復(fù)”作為海洋生態(tài)環(huán)境保護(hù)及其產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要生物工程手段,美國和加拿大聯(lián)合制定了海洋環(huán)境生物修復(fù)計(jì)劃,推動(dòng)該技術(shù)的應(yīng)用與發(fā)展。
1.4與海洋生物技術(shù)發(fā)展有關(guān)的海洋政策始終是公眾關(guān)注的問題
其中海洋生物技術(shù)的發(fā)展策略、海洋生物技術(shù)的專利保護(hù)、海洋生物技術(shù)對水產(chǎn)養(yǎng)殖發(fā)展的重要性、轉(zhuǎn)基因種類的安全性及控制問題、海洋生物技術(shù)與生物多樣性關(guān)系以及海洋環(huán)境保護(hù)等方面的政策、法規(guī)的制定與實(shí)施倍受關(guān)注。
2.重點(diǎn)發(fā)展領(lǐng)域
當(dāng)前,國際海洋生物技術(shù)的重點(diǎn)研究發(fā)展領(lǐng)域主要包括如下幾個(gè)方面:
2.1發(fā)育與生殖生物學(xué)基礎(chǔ)
弄清海洋生物胚胎發(fā)育、變態(tài)、成熟及繁殖各個(gè)環(huán)節(jié)的生理過程及其分子調(diào)控機(jī)理,不僅對于闡明海洋生物生長、發(fā)育與生殖的分子調(diào)控規(guī)律具有重要科學(xué)意義,而且對于應(yīng)用生物技術(shù)手段,促進(jìn)某種生物的生長發(fā)育及調(diào)控其生殖活動(dòng),提高水產(chǎn)養(yǎng)殖的質(zhì)量和產(chǎn)量具有重要應(yīng)用價(jià)值。因此,這方面的研究是近年來海洋生物技術(shù)領(lǐng)域的研究重點(diǎn)之一。主要包括:生長激素、生長因子、甲狀腺激素受體、促性腺激素、促性腺激素釋放激素、生長一催乳激素、滲透壓調(diào)節(jié)激素、生殖抑制因子、卵母細(xì)胞最后成熟誘導(dǎo)因子、性別決定因子和性別特異基因等激素和調(diào)節(jié)因子的基因鑒定、克隆及表達(dá)分析,以及魚類胚胎于細(xì)胞培養(yǎng)及定向分化等。
2.2基因組學(xué)與基因轉(zhuǎn)移
隨著全球性基因組計(jì)劃尤其是人類基因組計(jì)劃的實(shí)施,各種生物的結(jié)構(gòu)基因組和功能基因組研究成為生命科學(xué)的重點(diǎn)研究內(nèi)容,海洋生物的基因組研究,特別是功能基因組學(xué)研究自然成為海洋生物學(xué)工作者研究的新熱點(diǎn)。目前的研究重點(diǎn)是對有代表性的海洋生物(包括魚、蝦、貝及病原微生物和病毒)基因組進(jìn)行全序列測定,同時(shí)進(jìn)行特定功能基因,如藥物基因、酶基因、激素多肽基因、抗病基因和耐鹽基因等的克隆和功能分析。在此基礎(chǔ)上,基因轉(zhuǎn)移作為海洋生物遺傳改良、培育快速生長和抗逆優(yōu)良品種的有效技術(shù)手段,已成為該領(lǐng)域應(yīng)用技術(shù)研究發(fā)展的重點(diǎn)。近幾年研究重點(diǎn)集中在目標(biāo)基因篩選,如抗病基因、胰島素樣生長因子基因及綠色熒光蛋白基因等作為目標(biāo)基因;大批量、高效轉(zhuǎn)基因方法也是基因轉(zhuǎn)移研究的重點(diǎn)方面,除傳統(tǒng)的顯微注射法、基因槍法和攜帶法外,目前已發(fā)展了逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)法,電穿孔法,轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)法及胚胎細(xì)胞介導(dǎo)法等。
2.3病原生物學(xué)與免疫
隨著海洋環(huán)境逐漸惡化和海水養(yǎng)殖的規(guī)?;l(fā)展,病害問題已成為制約世界海水養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的瓶頸因子之一。開展病原生物(如細(xì)菌、病毒等)致病機(jī)理、傳播途徑及其與宿主之間相互作用的研究,是研制有效防治技術(shù)的基礎(chǔ);同時(shí),開展海水養(yǎng)殖生物分子免疫學(xué)和免疫遺傳學(xué)的研究,弄清海水魚、蝦、貝類的免疫機(jī)制對于培育抗病養(yǎng)殖品種、有效防治養(yǎng)殖病害的發(fā)生具有重要意義。因此,病原生物學(xué)與免疫已成為當(dāng)前海洋生物技術(shù)的重點(diǎn)研究領(lǐng)域之一,重點(diǎn)是病原微生物致病相關(guān)基因、海洋生物抗病相關(guān)基因的篩選、克隆,海洋無脊椎動(dòng)物細(xì)胞系的建立、海洋生物免疫機(jī)制的探討、DNA疫苗研制等。
2.4生物活性及其產(chǎn)物
海洋生物活性物質(zhì)的分離與利用是當(dāng)今海洋生物技術(shù)的又一研究熱點(diǎn)?,F(xiàn)人研究表明,各種海洋生物中都廣泛存在獨(dú)特的化合物,用來保護(hù)自己生存于海洋中。來自不同海洋生物的活性物質(zhì)在生物醫(yī)學(xué)及疾病防治上顯示出巨大的應(yīng)用潛力,如海綿是分離天然藥物的重要資源。另外,有一些海洋微生物具有耐高溫或低溫、耐高壓、耐高鹽和財(cái)?shù)蜖I養(yǎng)的功能,研究開發(fā)利用這些具特殊功能的海洋極端生物可能獲得陸地上無法得到的新的天然產(chǎn)物,因而,對極端生物研究也成為近年來海洋生物技術(shù)研究的重點(diǎn)方面。這一領(lǐng)域的研究重點(diǎn)包括抗腫瘤藥物、工業(yè)酶及其它特殊用途酶類、極端微生物定功能基因的篩選、抗微生物活性物質(zhì)、抗生殖藥物、免疫增強(qiáng)物質(zhì)、抗氧化劑及產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)等。
2.5海洋環(huán)境生物技術(shù)
該領(lǐng)域的研究重點(diǎn)是海洋生物修復(fù)技術(shù)的開發(fā)與應(yīng)用。生物修復(fù)技術(shù)是比生物降解含義更為廣泛,又以生物降解為重點(diǎn)的海洋環(huán)境生物技術(shù)。其方法包括利用活有機(jī)體、或其制作產(chǎn)品降解污染物,減少毒性或轉(zhuǎn)化為無毒產(chǎn)品,富集和固定有毒物質(zhì)(包括重金屬等),大尺度的生物修復(fù)還包括生態(tài)系統(tǒng)中的生態(tài)調(diào)控等。應(yīng)用領(lǐng)域包括水產(chǎn)規(guī)?;B(yǎng)殖和工廠化養(yǎng)殖、石油污染、重金屬污染、城市排污以及海洋其他廢物(水)處理等。目前,微生物對環(huán)境反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)機(jī)制、降解過程的生化機(jī)理、生物傳感器、海洋微生物之間以及與其它生物之間的共生關(guān)系和互利機(jī)制,抗附著物質(zhì)的分離純化等是該領(lǐng)域的重要研究內(nèi)容。
3.前沿領(lǐng)域的最新研究進(jìn)展
3.1發(fā)育與生殖調(diào)控
應(yīng)用GIH(性腺抑制激素)和GSH(性腺刺激激素)等激素調(diào)控甲殼類動(dòng)物成熟和繁殖的技術(shù)[1],研究了甲狀腺激素在金紹生長和發(fā)育中的調(diào)控作用,發(fā)現(xiàn)甲狀腺激素受體mRNA水平在大腦中最高,在肌肉中最低,而在肝、腎和鰓中表達(dá)水平中等,表明甲狀腺素受體在成體金銀腦中起著重要作用[1],對海鞘的同源框(Homeobox)基因進(jìn)行了鑒定,分離到30個(gè)同源框基因[1],建立了青鳉的同源框(Homeobox)基因[1],建立了青鳉胚胎干細(xì)胞系并通過細(xì)胞移植獲得了嵌合體青鳉[1],建立了虹鱒原始生殖細(xì)胞培養(yǎng)物并分離出Vasa基因[2],進(jìn)行斑節(jié)對蝦生殖抑制激素的分離與鑒定[2],應(yīng)用受體介導(dǎo)法篩選GnRH類似物,用于魚類繁殖[2],建立了海綿細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),用于進(jìn)行藥物篩選[2],建立了將海膽胚胎作為研究基因表達(dá)的模式系統(tǒng)[2],通過基因轉(zhuǎn)移開展了海膽胚胎工程的研究[2],研究了人葡糖轉(zhuǎn)移酶和大鼠已糖激酶cDNA在虹鱒胚胎中的表達(dá)[3],建立了通過細(xì)胞周期蛋白依賴的激酶活性測定海水魚苗細(xì)胞增殖速率的方法[3],研究了幾丁質(zhì)酶基因在斑節(jié)對蝦蛻皮過程中的表達(dá)[4],從海參分離出同源框基因,并進(jìn)行了序列的測定[4]。
3.2功能基因克隆
建立了牙鲆肝臟和脾臟mRNA的表達(dá)序列標(biāo)志,從深海一種耐壓細(xì)菌中分離到壓力調(diào)節(jié)的操縱子,從大西洋鮭分離到雌激素受體和甲狀腺素受體基因,從挪威對蝦中分離到性腺抑制激素基因[1];將DNA微陣列技術(shù)在海綿細(xì)胞培養(yǎng)上進(jìn)行了應(yīng)用,構(gòu)建了班節(jié)對蝦遺傳連鎖圖譜,建立了海洋紅藻EST,從海星卵母細(xì)胞中分離出成熟蛋白酶體的催化亞基,初步表明硬骨頭魚類IGF-I原E一肽具有抗腫瘤作用[2];構(gòu)建了海洋酵母De—baryomyceshansenii的質(zhì)粒載體,從鯉魚血清中分離純化出蛋白酶抑制劑,從蘭蟹血細(xì)胞中分離到一種抗菌肽樣物質(zhì),從紅鮑分離到一種肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子,發(fā)現(xiàn)依賴于細(xì)胞周期的激酶活性可用作海洋魚類苗種細(xì)胞增殖的標(biāo)記,克隆和定序了鰻魚細(xì)胞色素P4501AcD-NA,通過基因轉(zhuǎn)移方法分析了鰻細(xì)胞色素P450IAI基因的啟動(dòng)子區(qū)域,分離和克隆了鰻細(xì)胞色素P450IAI基因,建立了適宜于溝紹遺傳作圖的多態(tài)性EST標(biāo)記,構(gòu)建了黃蓋鰈EST數(shù)據(jù)庫并鑒定出了一些新基因,建立了班節(jié)對蝦一些組織特異的EST標(biāo)志,從經(jīng)HirameRhabdovirus病毒感染的牙鲆淋巴細(xì)胞EST中分離出596個(gè)cDNA克隆[3];用PCR方法克隆出一種自體受精雌雄同體魚類的ß一肌動(dòng)蛋白基因,從金鯛cDNA文庫中分離出多肽延伸因子EF-2CDNA克隆,在湖鱒基因組中發(fā)現(xiàn)了TC1樣轉(zhuǎn)座子元件[4];鑒定和克隆出的基因包括:南美白對蝦抗菌肽基因、牡蠣變應(yīng)原(allergen)基因、大西洋鰻和大西洋鮭抗體基因、虹鱒Vasa基因、青鳉P53基因組基因、雙鞭毛藻類真核啟始因子5A基因、條紋鱸GtH(促性腺激素)受體cDNA、鮑肌動(dòng)蛋白基因、藍(lán)細(xì)菌丙酮酸激酶基因、鯉魚視紫紅質(zhì)基因調(diào)節(jié)系列以及牙鲆溶菌酶基因等[1—4]。
3.3基因轉(zhuǎn)移
分離克隆了大馬哈魚IGF基因及其啟動(dòng)子,并構(gòu)建了大馬哈魚IGF(胰島素樣生長因子)基因表達(dá)載體[1]。通過核定位信號因子提高了外源基因轉(zhuǎn)移到斑馬魚卵的整合率[1],建立了快速生長的轉(zhuǎn)基因羅非魚品系并進(jìn)行了安全性評價(jià);對轉(zhuǎn)基因羅非魚進(jìn)行了三倍體誘導(dǎo),發(fā)現(xiàn)三倍體轉(zhuǎn)基因羅非魚盡管生長不如轉(zhuǎn)基因二倍體快,但優(yōu)于未轉(zhuǎn)基因的二倍體魚,同時(shí),轉(zhuǎn)基因三倍體雌魚是完全不育的,因而具有推廣價(jià)值[2];研究了超聲處理促進(jìn)外源DNA與金鯛結(jié)合的技術(shù)方法,將GFP作為細(xì)胞和生物中轉(zhuǎn)基因表達(dá)的指示劑;表明轉(zhuǎn)基因溝鯰比對照組生長快33%,且轉(zhuǎn)基因魚逃避敵害的能力較差,因而可以釋放到自然界中,而不會對生態(tài)環(huán)境造成大的危害[3];應(yīng)用GFP作為遺傳標(biāo)記研究了斑馬魚轉(zhuǎn)基因的條件優(yōu)化和表達(dá)效率[3];在抗病基因工程育種方面,構(gòu)建了海洋生物抗菌肽及溶菌酶基因表達(dá)載體并進(jìn)行了基因轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)[2];在轉(zhuǎn)基因研究的種類上,目前已從經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖魚類逐步擴(kuò)展到養(yǎng)殖蝦、貝類及某些觀賞魚類[2.3]。通過基因槍法將外源基因轉(zhuǎn)到虹鱒肌肉中獲得了穩(wěn)定表達(dá)[4]。
3.4分子標(biāo)記技術(shù)與遺傳多樣性
研究了將魚類基因內(nèi)含子作為遺傳多樣性評價(jià)指標(biāo)的可行性,應(yīng)用SSCP和定序的方法研究了大西洋和地中海幾種海洋生物的遺傳多樣性[1]。研究了南美白對蝦消化酶基因的多態(tài)性[1];利用寄生性原生動(dòng)物和有毒甲藻基因組DNA的間隔區(qū)序列作標(biāo)記檢測環(huán)境水體中這些病原生物的污染程度,應(yīng)用18S和5.8S核糖體RNA基因之間的第一個(gè)內(nèi)部間隔區(qū)(ITC—1)序列作標(biāo)記進(jìn)行甲殼類生物種間和種內(nèi)遺傳多樣性研究[2];研究了斑節(jié)對蝦三個(gè)種群的線粒體DNA多態(tài)性,用PCR技術(shù)鑒定了夏威夷Gobioid苗的種類特異性。通過測定內(nèi)含子序列揭示了南美白對蝦的種內(nèi)遺傳多樣性,采用同功酶、微衛(wèi)星DNA及RAPD標(biāo)記對褐鱒不同種群的遺傳變異進(jìn)行了評價(jià),在平魚鑒定并分離出12種微衛(wèi)星DNA,在美國加州魷魚上發(fā)現(xiàn)了高度可變的微衛(wèi)星DNA[3];弄清了一種深水魚類(Gonostomagracile)線粒體基因組的結(jié)構(gòu),并發(fā)現(xiàn)了硬骨魚類tRNA基因重組的首個(gè)實(shí)例,測定了具有重要商業(yè)價(jià)值的海水輪蟲的衛(wèi)星DNA序列,用RAPD技術(shù)在大鯪鲆和鰨魚篩選到微衛(wèi)星重復(fù)片段,從多毛環(huán)節(jié)動(dòng)物上分離出高度多態(tài)性的微衛(wèi)星DNA,用RAPD技術(shù)研究了泰國東部泥蟹的遺傳多樣性[3];用AFLP方法分析了母性遺傳物質(zhì)在雌核發(fā)育條紋鱸基因組中的貢獻(xiàn)[4]。
3.5DNA疫苗及疾病防治
構(gòu)建了抗魚類壞死病毒的DNA疫苗[1];開展了虹鱒IHNVDNA疫苗構(gòu)建及防病的研究,表明用編碼IHNV糖蛋白基因的DNA疫苗免疫虹鱒,誘導(dǎo)了非特異性免疫保護(hù)反應(yīng),證明DNA免疫途徑在魚類上的可行性,從虹鱒細(xì)胞系中鑒定出經(jīng)干擾素可誘導(dǎo)的蛋白激酶[2];建立了養(yǎng)殖對蝦病毒病原檢測的ELISA試劑盒,用PCR等分子生物學(xué)技術(shù)鑒定了蝦類的病毒性病原,將魚類的非特異性免疫指標(biāo)用于海洋環(huán)境監(jiān)控,研究了抗病基因轉(zhuǎn)移提高鯛科魚類抗病力的可行性,研究了蛤類唾液酸凝集素的抗菌防御反映[2];研究了一種海洋生物多糖及其衍生物的抗病毒活性[3];建立了測定牡蠣病原的PCR—ELISA方法[3];研究了LatrunculinB毒素在紅海綿體內(nèi)的免疫定位[4]。
3.6生物活性物質(zhì)
從海藻中分離出新的抗氧化劑[1],建立了大量生產(chǎn)生物活性化合物的海藻細(xì)胞和組織培養(yǎng)技術(shù),建立了通過海綿細(xì)胞體外培養(yǎng)制備抗腫瘤化合物的方法[1];從不同生物(如對蝦和細(xì)菌)中鑒定分離出抗微生物肽及其基因,從魚類水解產(chǎn)物中分離出可用作微生物生長底物的活性物質(zhì),海洋生物中存在的抗附著活性物質(zhì),用血管生成抑制劑作為抗受孕劑,從蟹和蝦體內(nèi)提取免疫激活劑,從海洋藻類和藍(lán)細(xì)菌中純化光細(xì)菌致死化合物,海星抽提物在小鼠上表現(xiàn)出批精細(xì)胞形成的作用,從海洋植物Zosteramarina分離出一種無毒的抗附著活性化合物,從海綿和海鞘抽提物分離出抗腫瘤化合物,開發(fā)了珊瑚變態(tài)天然誘導(dǎo)劑,從海膽中分離出一種抗氧化的新藥,在海洋雙鞭毛藻類植物中鑒定出長碳鏈高度不飽和脂肪酸(C28),表明海洋真菌是分離抗微生物肽等生物活性化合物的理想來源[2];發(fā)現(xiàn)海洋假單胞桿菌的硫酸多糖及其衍生物具有抗病毒活性,從硬殼蛤分離出谷光甘肽一S一轉(zhuǎn)移酶,從鯉血清中分離出絲氨酸蛋白酶抑制劑,從海綿中分離出氨激脯氨酸二肽酶,從一種珊瑚分離出具DNA酶樣活性的物質(zhì),建立了開放式海綿養(yǎng)殖系統(tǒng),為生物活性物質(zhì)的大量制備提供了充足的海綿原料[3];從蝦肌水解產(chǎn)物中分離到抗氧化肽物質(zhì)[4];從一種海洋細(xì)菌中分離純化出N一乙酸葡糖胺一6一磷酸脫乙酸酶[4]。
3.7生物修復(fù)、極端微生物及防附著
研究了轉(zhuǎn)重金屬硫蛋白基因藻類對海水環(huán)境中重金屬的吸附能力,表明明顯大于野生藻類[1],研究了石油降解微生物在修復(fù)被石油污染的海水環(huán)境上的可療性及應(yīng)用潛力[1];研究了海洋磁細(xì)菌在去除和回收海水環(huán)境中重金屬上的應(yīng)用潛力[1];用Bacillus清除養(yǎng)魚場污水中的氮,用分子技術(shù)篩選作為海水養(yǎng)殖餌料的微藻,開發(fā)了六價(jià)鉻在生物修復(fù)上的應(yīng)用潛力,分離出耐冷的癸烷降解細(xì)菌,研究了海洋環(huán)境中多芳香化烴的微生物降解技術(shù)[2];從噬鹽細(xì)菌分離出滲透壓調(diào)節(jié)基因,并生產(chǎn)了重組Ectoine(滲透壓調(diào)節(jié)因子),從2650米的深海分離到一種耐高溫的細(xì)菌,這種細(xì)菌可用來分離耐高溫和熱穩(wěn)定的酶,在耐高溫的archaea發(fā)現(xiàn)了D型氨基酸和無氧氨酸消旋酶,測定了3種海洋火球菌的基因組DNA序列,借助于CROSS/BLAST分析進(jìn)行了特定功能基因的篩選,從海底沉積物、海水和北冰洋收集了1000多種噬冷細(xì)菌,并從這些細(xì)菌中分離到多種冷適應(yīng)的酶[2];建立了一種測定藤壺附著誘導(dǎo)物質(zhì)的簡單方法,研究了Chlorophyta和共生細(xì)菌之間附著所必需的形態(tài)上相互作用,研究了珊瑚抗附著物質(zhì)(dterpene)類似物的抗附著和麻醉作用[3];分析了海岸環(huán)境中污著的起始過程,并對沉積物和附著物的影響進(jìn)行了檢測[4]。
4.展望與建議
論文摘要闡述楊樹新造林病害發(fā)生原因及防治對策,介紹楊樹爛皮病與楊樹主要害蟲的防治措施,以期指導(dǎo)楊樹產(chǎn)業(yè)發(fā)展。
楊樹是東??h最主要的造林綠化樹種之一,栽植楊樹已成為該縣農(nóng)村致富的支柱產(chǎn)業(yè)之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)該縣已發(fā)展楊樹4萬多公頃,蓄積量達(dá)160余萬立方米,楊木及加工年總產(chǎn)值可達(dá)5億多元。楊樹為培育森林資源、保護(hù)生態(tài)環(huán)境、發(fā)展林業(yè)生產(chǎn)和該縣的新農(nóng)村建設(shè)發(fā)揮了巨大作用。隨著種植面積的不斷擴(kuò)大,由于樹種單一、林相單純常引起以楊舟蛾、楊尺蛾、楊樹天牛等蟲害和新造林出現(xiàn)大面積枯死等病害日趨加劇,經(jīng)常大面積暴發(fā)成災(zāi),在一定程度上制約了楊樹產(chǎn)業(yè)發(fā)展的現(xiàn)狀。經(jīng)省林科院、省森防站等單位合作研究,目前在病害暴發(fā)原因、蟲害防治生物篩選和病蟲害生態(tài)無公害防治技術(shù)等方面取得了很大的進(jìn)展。
1楊樹新造林病害發(fā)生原因及防治對策
1.1發(fā)生原因
近幾年,周邊地區(qū)楊樹新造林病害發(fā)生嚴(yán)重,成活率較低,有的地塊甚至全軍覆滅。通過對近20余個(gè)苗圃近10萬株楊樹苗和部分新造林的調(diào)查發(fā)現(xiàn),造成楊樹新造林發(fā)病、死亡的原因主要有以下幾個(gè)方面。
(1)密度過大。絕大多數(shù)農(nóng)戶沒有按標(biāo)準(zhǔn)化育苗操作規(guī)程育苗。由于近幾年楊樹苗木價(jià)格持高不下,一些苗圃和育苗戶為了追求一時(shí)的經(jīng)濟(jì)利益,加大育苗密度,扦插密度超過規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)的2倍以上,達(dá)9.0~10.5萬株/hm2,有的甚至還多,造成苗木抗病性降低。
(2)施肥過多。苗戶為了追求苗木的出圃量,大量追施化肥。據(jù)了解,有的苗戶追施碳銨和尿素達(dá)3000kg/hm2,部分苗戶也都在2250kg/hm2左右,使苗木生長期推遲。這樣苗木雖然長高了、長粗了,但苗木組織不充實(shí),木質(zhì)化程度低,細(xì)胞壁過薄,機(jī)械組織不發(fā)達(dá),致使苗木抵抗自然災(zāi)害的能力降低。
(3)長期單一培育。單一培育楊樹苗等深根系樹種,使苗圃的土壤肥力下降,同時(shí)造成危害楊樹的病原微生物的大量累積,這樣一旦環(huán)境條件適宜,楊樹苗即可發(fā)病。
(4)未選擇優(yōu)良種條。大部分苗戶沒有按照要求選擇良種壯苗作為種條來繁殖苗木,而是采用留床苗和買剩下的瘦弱苗,以及平茬剪下的插條作為種條來培育苗木;再加上苗圃管理粗放,沒有按照育苗技術(shù)要求進(jìn)行科學(xué)施肥、灌水、除草、治病除蟲等,使苗圃內(nèi)病原菌微生物長期積累、存活,這樣一旦苗木的抵抗性降低,極易發(fā)生病害。
1.2防治對策
防治該病的重點(diǎn)是做好預(yù)防,如果預(yù)防措施到位,是完全可以避免和控制病害發(fā)生的。針對目前在苗圃管理和新造林技術(shù)中存在的問題,應(yīng)做好以下幾個(gè)方面的工作。
(1)最好在冬季將圃地深翻晾曬,春季育苗前(2月份)施土雜肥75m3/hm2、甲拌磷120kg/hm2、硫酸亞鐵150~225kg/hm2,整地作床后育苗。
(2)避免重茬。對同一苗圃地最好不要連年培育同一品種的樹苗,將深根性樹種與淺根性樹種、落葉樹種與常綠樹種每隔2年相互輪作1次。
(3)應(yīng)選擇優(yōu)良粗壯的插條作為種條,避免使用瘦弱苗、帶病蟲種苗作為種條來培育苗木,這樣可以培育出健壯的苗木,提高苗木的抗病蟲害能力。
(4)苗木密度要合理,培育苗木技術(shù)要規(guī)范。
(5)插穗在扦插前,要用50%多菌靈+75%百菌清1000倍液或50%多菌靈+40%拌種雙1000倍液浸泡2h后再行扦插。在生長季節(jié)從6月中下旬開始,每隔15d噴50%多菌靈或75%百菌清、50%退菌特800倍液、70%甲基托布津1000倍液,連噴3遍,可起到防病、治病效果。
(6)起苗時(shí),要盡量保持根系完整,做到隨起隨運(yùn)、隨栽,若不能及時(shí)栽植的,最好放在水堂中浸泡,栽植前用70%代森錳鋅700倍液浸泡20h后再栽,栽植后的苗木要及時(shí)澆水培土。盡量避免從外地長途調(diào)運(yùn)苗木,若確實(shí)需要,要對苗木進(jìn)行包裝保濕之后再運(yùn)輸。2楊樹爛皮病及其防治
楊樹爛皮病別名楊樹腐爛病,癥狀是發(fā)生在樹干及枝條上,表現(xiàn)為干腐及枯枝2種類型。干腐型主要發(fā)生在主干、大枝及枝干分叉處。初期病部呈暗褐色水腫狀斑,皮層組織腐爛變軟,病斑失水后樹皮干縮下陷,有時(shí)龜裂,有明顯的黑褐色邊緣。后期病斑上生出許多針頭狀黑色小突起,即病菌分生孢子器,潮濕時(shí)從中擠出橘紅色卷絲狀分生孢子角。在適宜的條件下,病斑擴(kuò)展快,當(dāng)病斑包圍樹干一周時(shí),其上部枯死。病斑皮層變暗褐色腐爛,有時(shí)可達(dá)木質(zhì)部,易與木質(zhì)部剝離。當(dāng)環(huán)境條件有利樹木生長時(shí),抗病性提高,病斑周圍可長出愈傷組織,阻止病斑的擴(kuò)展??萆倚椭饕l(fā)生在一至四年生幼樹或大樹枝條上,初期病部呈暗灰色,癥狀不明顯,當(dāng)病部迅速擴(kuò)展繞枝干一周后,其上部枯死。此后,枯枝上散生許多小黑點(diǎn),即病菌的分生孢子器。
病菌以菌絲、分生孢子器或子囊殼在病組織內(nèi)越冬。翌年春天,當(dāng)溫度在10~15℃、濕度為60%~80%時(shí),產(chǎn)生分生孢子進(jìn)行傳播,孢子萌發(fā)通過各種傷口侵入寄主組織,潛育期為6~10d。每年3月中下旬開始發(fā)病,形成新病斑,老病斑繼續(xù)擴(kuò)展。4月中旬至5月下旬為發(fā)病盛期,10月停止發(fā)展。楊樹爛皮病的2種病原真菌均為弱寄生菌,只能侵染生長不良、樹勢衰弱的樹木。病菌先在各種傷口或衰弱部位生活,并逐步對活組織進(jìn)行侵染。樹皮含水量與病害有密切關(guān)系,樹皮含水量低有利于病害的發(fā)生,該病菌可以在枯死的樹木上進(jìn)行較長時(shí)間的腐生生活。一切不利于楊樹生長的環(huán)境因素,如氣候條件、土壤條件、管理粗放、其他病蟲危害等使樹木生長衰弱,都可以導(dǎo)致該病的發(fā)生。病害發(fā)生嚴(yán)重的大樹,可刮除病斑,涂藥防治。
3楊樹主要害蟲防治
(1)食葉類害蟲。主要指楊扇舟蛾、楊小舟蛾、楊二尾舟蛾、楊黃卷葉螟、刺蛾、楊尺蠖、金龜子等。幼樹可在害蟲低齡期、蟲態(tài)相對整齊時(shí)用高壓噴霧機(jī)噴灑滅幼脲防治。高大樹木,可用氧化樂果、久效磷等在樹干基部或根部打孔注射防治,也可用煙霧機(jī)熏煙。
(2)刺吸類害蟲。主要是草履蚧、葉蟬、紅蜘蛛、日本龜蠟蚧等。這類害蟲早春上樹吸取樹木嫩芽、嫩枝的汁液,常造成整株枯死??稍谌粝x上樹前用塑料布設(shè)置20cm寬的隔離帶,并輔助人工撲殺?;瘜W(xué)防治,在樹干1m以下用廢機(jī)油加有機(jī)磷農(nóng)藥涂成10cm寬的藥環(huán),以阻止草履蚧上樹。在害蟲上樹后可用內(nèi)吸性農(nóng)藥噴霧防治。